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作为免疫分析法的一种,FIA同样存在两种模式,即竞争型和夹心型。其中竞争型(以标记抗原的竞争型为例)的测定原理是基于未标记的抗原(Ag)和标记抗原(Ag-L)竞争结合有限的抗体(Ab)而实现的免疫分析法。检测时,Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后,Ag和Ab的结合使得Ag-L与Ab的免疫复合物的量减少。样品中存在的Ag越多,Ab结合的Ag-L便越少,从Ab-Ag-L免疫复合物的减少或游离Ag-L的增加,可以定量测定出样品中待测抗原的含量。其反应过程如下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)。对夹心型免疫分析来说,其反应原理是在免疫反应的载体上固定过量的Ab,然后加入一定量的Ag,免疫反应后,再加入过量的标记抗体(Ab-L),以形成“三明治”式夹心免疫复合物。样品中存在的Ag越多,结合的Ab-L也越多,夹心免疫复合物的标记荧光信号就越强。反应过程如下:Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。广东免疫层析法荧光分析仪品牌全自动免疫荧光分析仪采用 机械手式设计,完美解决模组高耦合问题,大幅降低了安装复杂度和故障率。
常见荧光素及其特性FITC:黄色结晶粉末,吸收光490~495nm,发射光520~530nm,明亮的黄绿色荧光。RB200:橘红色粉末,吸收光570nm,发射光595~600nm,橘红色荧光。TRITC:紫红色粉末,吸收光550nm,发射光620nm,橙红色荧光。镧系:Eu3+、Tb3+等。PE:吸收光490~560nm,发射光595nm,红色荧光。其它:酶作用后产生荧光物质,具体如下表:酶底物产物激发光发射光B-GMUGMU360450APMUPMU360450HRPHPA二聚体317414合适荧光素的选择具有与蛋白质形成共价键的化学基团。荧光素-N=C+NH-蛋白质荧光素-N-C-N-蛋白质‖︱︱‖︱SHHSH荧光效率高,标记后下降不明显。荧光色泽与背景色泽对比鲜明。标记后能保持生物学活性和免疫活性。标记方法简单、快速。安全无毒。
荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂,用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量鉴定。荧光免疫技术包括哟荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测,可在荧光显微镜下直接观察结果,称为荧光免疫显微技术,或是应用流式细胞仪进行自动分析检测,称为流式荧光免疫技术。荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。时间分辨荧光分析是以稀土离子为标记物,特异性荧光为特征的检测技术,是非放射性标记技术中的佼佼者。
免疫荧光是一种将抗原抗体结合反应与生物标记技术相结合的技术,在科研及临床上有着较广应用。普通的免疫荧光技术在对抗原含量进行测定时存在一定的局限性,在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光,用普通荧光素来检测生物样品时,蛋白质本身产生的荧光会对实验产生干扰,实验检测的灵敏度严重下降。为了解决这一问题,1983年SOINI和KOJOLA提出以镧系元素标记为示踪螯合物和荧光测量相结合,建立了时间分辨荧光分析技术。时间分辨方式的免疫荧光分析方法可以对蛋白质、酶以及同位素等物质进行标记,并且不再受检测物种自然荧光的干扰。快检产品覆盖胶体金、比浊、荧光等多个方法学,手持、单通道、多通道、全自动等全门类机型可供客户选择。广东免疫层析法荧光分析仪品牌
检测项目:PCT、HIV、CRP、NT-proBNP、MYO等免疫荧光诊断试剂项目。江西单通道干式免疫荧光分析仪在线议价
时间分辨荧光免疫测定:以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰,以及激发光源的杂射光的影响,使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作荧光标记物,利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点,延长荧光测量时间,待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定,所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光,从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。TR-FIA的测定原理见图17-4。以双抗体夹心法为例的测定反应程序见图17-5。其中增强液的作用是使荧光信号增强。因为免疫反应完成后,生成的抗原-抗体-铕标记物复合物在弱碱性溶液中,经激发后所产生的荧光信号甚弱。在增强液中可至pH2~3,铕离子很容易解离出来,并与增强液中的β-二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物,十分有利于荧光测量。江西单通道干式免疫荧光分析仪在线议价
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