细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃，后再放置到液氮槽中长期保存。

    程序降温盒的使用经验（*供参考）：虽然梯度降温的起始点是室温20°左右，但是冻存液里面的DMSO对细胞0性，尤其是室温的时候，沈阳低温冻存盒图片，所以冻存盒和冻存液先预放至4°，等把细胞用冻存液重悬好了放入冻存盒后，立刻转移到-80度冰箱，第二天再转移到液氮。冻存盒中的异丙醇应使用5~7此后更换一次，而且保证液体量不低于250ml刻度线，否则降温效果会受到影响。异丙醇：无色透明具有乙醇气味的可燃性、0液体，沈阳低温冻存盒图片，沈阳低温冻存盒图片，熔点是-87.9度。请注意其可燃性!

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推荐的，所述冻存盒盖连接块与连接卡槽相互咬合连接。

推荐的，所述冻存盒本体为酚醛泡沫材料。

推荐的，所述冻存管摆放架由相同形状大小的摆放架、第二摆放架、第三摆放架和第四摆放架组合而成。

推荐的，所述导向柱的上端面与冻存盒本体的上端面为同一水平面，且导向柱关于冻存盒本体的轴线对称设置有4个。

推荐的，所述分隔板对称设置有2个，且分隔板的两端与分隔板固定卡槽为嵌入式安装结构。

推荐的，所述冻存区、第二冻存区和第三冻存区上的冻存管插孔的孔径大小均不相同。

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请问梯度冻存盒到底怎么使用？两种方法：

是先把冻存盒放在室温，把细胞放在冻存盒，置于-80度？（這样的好处：细胞可以从室温开始缓慢降温）（并且，据说冻存盒的使用本来就是从20度室温开始降）

还是将冻存盒先放在4度降温，再将细胞放进去，放于-80？（這样的好处：常温下冻存液中DMSO对细胞损伤大，从4度开始降温比较好？）用液氮冻存细胞是医学、生物学等研究领域常用的技术，目前国内实验室液氮中存放的冻存盒通常为不透明的盒体，在盒体内设置有多个隔板，形成能插入多个管瓶的空间，能够储藏多个细胞样品。但是现有的细胞冻存盒，保温效果差，在运输过程中冷气快速流失造成细胞的变质，同时冻存管摆放架只可摆放单一结构的冻存试管，功能性弱，并且冻存管摆放架的高度不可调节，无法针对不同高度的冻存试管进行保存。针对上述问题，急需设计一种新型的细胞冻存盒。技术实现要素：本实用新型的目的在于提供一种细胞冻存盒，以解决上述背景技术中提出现有的细胞冻存盒，保温效果差，在运输过程中冷气快速流失造成细胞的变质，同时冻存管摆放架只可摆放单一结构的冻存试管，功能性弱，并且冻存管摆放架的高度不可调节，无法针对不同高度的冻存试管进行保存的问题。

冻存细胞时要缓慢冷冻，细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻时，细胞内外的水分都会很快形成冰晶，冰晶的形成会给细胞带来很大的损伤，即使在有保护剂的条件下，温度过快的下降也会对细胞有一定的损伤，所以要程序降温，以提高细胞的存活。目前人们冻细胞多的还是将要冻存的细胞放四度，负二十度，负八十度，第二天转入液氮这样一个过程，程序复杂，中间过程稍有不慎就会影响冻存效果。技术实现要素：有鉴于现有技术的上述缺点，本实用新型所要解决的技术问题是提供一种程序降温盒，以解决现有技术的不足。为实现上述目的，本实用新型提供了一种程序降温盒，其特征在于：包括降温盒主体、盒盖、冻存管架，所述降温盒主体内壁固定一层保温棉，所述冻存管架装在降温盒主体上部，所述降温盒主体与冻存管架之间有中空层。杭州科默斯科技有限公司和传统的昨天告别，向规范的未来迈进。

所需仪器：

-86℃超低温冰箱

离心机

生物安全柜

电动移液器

CO2培养箱

倒置显微镜

液氮罐

所需试剂：

胎牛血清（FBS）

细胞培养级 DMSO

冻存液：80%FBS+**MSO

无菌 1×PBS pH=7.2

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

异丙醇

所需耗材：

离心管（15ml、50ml）

T-25 细胞培养瓶

一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）

8ml 冻存管

程序降温盒

操作步骤：

将需要那冻存的细胞从 CO2培养箱中取出，在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，

吸弃瓶内的培养基；

向培养内加入无菌 1×PBS 3ml，之后水平放置培养瓶，旋转震荡培养瓶，使 PBS

能够浸润到培养平面上所都的面积，吸弃 PBS；

重复步骤 2 一次，之后向瓶内加入消化液 1ml，轻微震荡后放入 37℃CO2培养

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Biosharp程序降温盒不需要添加任何醇类液体，可在-80℃的冰箱条件下，为细胞提供-1℃每分的降温速率，满足多数细胞冻存的较好条件。该程序降温盒采用高级聚乙烯泡沫材料制成，内含合金内芯，对冻存环境没有影响，不会影响周围其他冻存样品。细胞冻存效果一致且实验重复性好。

特点:

使用方便

无需醇类液体进行冷冻

后续使用成本较低

更好的细胞活力

实验重复性好

使用方法：

1.将需要装有细胞的冻存管放入室温存放的程序降温盒内，盖上降温盒盖。

2.将程序降温盒放入-80℃冰箱，冷冻4小时以上以达到冻存效果。

3.取出程序降温盒，迅速将冻存管移至液氮环境储存或进行其他后续操作。

4.使用后将程序降温盒置于室温环境，待程序降温盒及合金内芯恢复至室温后备用。

注意事项：

1.放入冰箱前请保证金属圈是平躺在盒底的，且盖子是盖住的。

2.放入冰箱后避免与其他物质紧挨，务必保证周围有2.5cm间隙。

3.闲置时请置于干燥与阴凉处，尽量避免60℃以上高温及紫外光线。

4.强烈建议冻存后检查细胞活性后，再终止原始细胞株的培养。 沈阳低温冻存盒图片

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