随着分析方法的飞速发展,无论是食品中有毒有害物质,江西干式免疫荧光分析仪市场价,还是环境中痕量元素的检测,或者生物体内功能因子的分析,都迫切需要一种灵敏度高、快速准确、性能稳定的痕量分析方法。时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolvedfluoroimmunoassay,简称为TRFIA)是20世纪80年代中期发展起来的一种新的荧光标记技术。这种方法应用某些特殊的稀土金属,能够区分背景光的散射所引起的干扰,从而大幅度提高了分析的灵敏度。与传统的酶免疫法(EIA),江西干式免疫荧光分析仪市场价、发射免疫分析法(RIA)相比,江西干式免疫荧光分析仪市场价,它具有很多优点:灵敏度高达10-19;稳定性好,克服了酶和放射性荧光物质的不稳定性;动态范围宽;试剂货架期长;无放射性危害等,时间分辨荧光分析目前被公认为是高灵敏度的分析方法之一。由于一般荧光测定中的本底较高等问题,荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。江西干式免疫荧光分析仪市场价
时间分辨荧光免疫测定:以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰,以及激发光源的杂射光的影响,使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作荧光标记物,利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点,延长荧光测量时间,待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定,所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光,从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。TR-FIA的测定原理见图17-4。以双抗体夹心法为例的测定反应程序见图17-5。其中增强液的作用是使荧光信号增强。因为免疫反应完成后,生成的抗原-抗体-铕标记物复合物在弱碱性溶液中,经激发后所产生的荧光信号甚弱。在增强液中可至pH2~3,铕离子很容易解离出来,并与增强液中的β-二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物,十分有利于荧光测量。 山东免疫荧光分析仪产品支持荧光定量检测。
用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的荧光强度,根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值,准确地测定反应体系中被分析物的浓度。TRFIA 所使用的荧光标记物是镧系稀土金属[4],由于镧系稀土金属离子螯合物有很长的荧光寿命(微秒级),有别于传统荧光的短荧光寿命,使其能通过时间分辨方式区别于背景荧光(钠秒级),正是由于荧光衰变时间长,可以延缓测量时间,待测样品中短寿命的本底荧光衰变后再测稀土离子的特异荧光,因此可完全消除本底荧光的干扰。镧系稀土金属离子螯合物荧光很宽的Stokes 位移使其容易通过波长分辨方式进一步区别于背景荧光,提高方法学的稳定性。镧系稀土金属离子螯合物狭窄的荧光发射峰使其荧光检测具有很高的效率,进一步提高了信号检测的特异性和灵敏性。此外,由于检测时加入了荧光增强液,它可使原来荧光增强100万倍,以上各种因素使TRFIA 的检测灵敏度和准确性大幅度提高。
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
直接法:将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。
间接法:如检查未知抗原,先用已知未标记的特异抗体(di一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标记的抗抗体(di二抗体)与抗原标本反应,使之形成抗原—抗体—抗体复合物,再用水洗去未反应的标记抗体,干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体,则表明抗原标本是已知的,待检血清为di一抗体,其它步骤的抗原检查相同。
标记的抗抗体是抗球蛋白抗体,同于血清球蛋白有种的特异性,如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应,因此,制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。 用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(或组织)化学技术。
荧光法是一种非常有用的工具,各种各样的分析领域都在利用它。由于它具有高灵敏度、好的选择性以及可提供多参数信息(如,荧光强度、荧光寿命、荧光各向异性)等特点,所以被用于生物制药研究、临床诊断、宇宙空间环境监测、免疫分析中分子间作用原理研究、DNA序列分析、荧光原位杂交以及细胞成分分析等。镧系系复合物由于其特有的荧光特性而受到关注,特别是在临床生化分析中。利用镧系元素的荧光特性,构建时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂以及创建新的灵敏度高的荧光免疫分析方法(fluoroimmunoassay)是当今临床生化的主要研究方向。 半自动免疫荧光分析仪内置4G上网模块,支持通过云端远程质控、远程标曲升级等。海南免疫层析法荧光分析仪批发价
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时间分辨荧光免疫分析可用来检测生物活性物质,特别是在生物样品免疫分析中,显示出它愈来愈多的独特优点。在,抗体检测,病毒抗原分析,药物代谢分析以及各种体内或外源性超微量物质的分析中,应用TRFIA法越来越普遍。近年来,已将这项技术应用于核酸探针分析和细胞活性分析、生物大分子分析,发展十分迅速。时间分辨荧光免疫分析具有灵敏度高、特异性强、所用试剂有良好的稳定性、检测限较宽、尤其是能消除常规荧光测定中的高背景等优点,是非放射免疫分析中很有发展潜力的分析方法。有关研究论文约占免疫分析文献的10%-15%。寻找、设计并合成出较理想的镧系元素螯合物探针;改进标记技术和简化分离技术;采用多重标记法进行放大,进一步提高灵敏度以及提高检测手段的程序化,进一步提高信噪比将成为时间分辨荧光免疫分析的发展方向。江西干式免疫荧光分析仪市场价
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