免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。将试剂抗原或试剂抗体用荧光物质进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光物质，这种免疫技术，称为免疫荧光技术。
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偶联生物素—亲和素系统的酶免法利用了一个亲和素分子可以与4个生物素分子结合的特性，使传统的灵敏度较高的酶免法的灵敏度又有明显的放大作用。时间分辨荧光免疫分析时间分辨荧光免疫分析（Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA）是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。河南干式免疫荧光分析仪批发价荧光分析仪有哪些优势，天纵易骏告诉您。
荧光免疫测定技术的概念
将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。
技术分类
荧光抗体技术（荧光显微镜技术）：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。
免疫荧光测定技术：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。
荧光的产生
物质吸收外界能量而进入激发状态，在恢复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。这种物质，称为荧光素。 由光激发所引起的荧光，为光致荧光------荧光免疫技术 ； 由化学反应所引起的荧光，为化学荧光------化学发光技术。
荧光素的荧光特性
停止供能，荧光现象随即终止。
对光的吸收和荧光的发射具高度选择性。入射光波长<发射光波长。
荧光效率： 发射荧光的光量子数
荧光效率=---------------------------
吸收光的光量子数
随着人们对食品安全的要求越来越高，国际社会上对食品中有毒有害物质的检测越来越严格，各种有毒有害物质的限量标准也在不断提高。近年来我国食品被进口国拒绝、扣留、退货、索赔和终止合同的事件时有发生，为了解决出口食品受阻和严格控制有害进口食品进入国门，保证人民的身体健康，必须找到灵敏准确的检测方法。TRFIA 是随着免疫分析和化学分析的发展而成孰起来的一种新的检测方法。作为一种灵敏度高、特异性好、安全的超微量分析测定方法，目前已成熟地应用在临床医学领域，同时也在食品安全领域崭露头角，用于快速检测食品中的大肠杆菌O157:H7、和有害金属等。相信随着检测设备的大力应用和各种检测试剂盒的不断开发，TRFIA将在食品安全领域发挥更大的作用. 时间分辨荧光免疫分析可用来检测生物活性物质，特别是在生物样品免疫分析中，显示出它愈来愈多的独特优点。
时间分辨荧光免疫测定：以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰，以及激发光源的杂射光的影响，使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定（timeresolvedfluorescenceimmunoassay，TR-FIA）是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。TR-FIA的测定原理见图17-4。以双抗体夹心法为例的测定反应程序见图17-5。其中增强液的作用是使荧光信号增强。因为免疫反应完成后，生成的抗原－抗体－铕标记物复合物在弱碱性溶液中，经激发后所产生的荧光信号甚弱。在增强液中可至pH2～3，铕离子很容易解离出来，并与增强液中的β-二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物，十分有利于荧光测量。 荧光法是一种非常有用的工具，各种各样的分析领域都在利用它。中国台湾干式免疫荧光分析仪代理商
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时间分辨荧光免疫分析的原理：时间分辨荧光免疫分析的原理就是使用三价稀土离子（如Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+）作为示踪物，通过这些稀土离子与具有双功能结构的螯合剂以及抗原形成稀土离子-螯合剂-抗原螯合物。当标记抗原、待测抗原共同竞争抗体，形成免疫复合物，由于免疫复合物中抗原抗体结合部分就含有稀土离子，当采取一些办法将结合部分与游离部分分开后，利用时间分辨荧光分析仪，即可测定复合物中的稀土离子发射的荧光强度，从而确定待测抗原的量。正常情况下，免疫复合物中的稀土离子自身荧光信号很微弱，若加入一种酸性增强液，稀土离子从免疫复合物中解离出来，和增强液中的β-二酮体、三正辛基氧化膦、Triton X-100等成分形成一种微囊。后者被激发光激发后，则稀土离子可以发出长寿命的极强的荧光信号，使原来微弱的荧光信号增强将近100万倍。采用时间分辨技术测量荧光，采用了门控技术，它是使背景荧光信号降低到零以后，再测定长寿命标记物的荧光。 中国台湾干式免疫荧光分析仪代理商
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