冻存盒肯定是先放在室温，然后放进去细胞，置于-80，利用异丙醇实现梯度降温啊。)

根据论坛里的讨论，异丙醇使用过一段时间后是要更换的，但是我一直没换过，也没发现很大问题。

经验2：我们实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。

经验3：异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性0液体。注意了有可燃性，苏州CellHome程序冻存盒批发!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤，苏州CellHome程序冻存盒批发。刺激数据：眼睛- 兔子100 毫克/ ，苏州CellHome程序冻存盒批发!请注意清理!

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品名：梯度降温盒 、程序降温盒、细胞冻存盒货号：美国Nalgene程序降温盒5100-0001用途：细胞冻存、细胞复苏产品规格：18孔可放冻存管：1ml、1.2ml、1.5ml、2ml冻存盒尺寸：高度86mm，直接117mm易于使用，只需要***异丙醇和机械冷冻设备本产品采用聚碳酸脂（PC）盒体，蓝色高密度聚乙烯（HDPE）盖，白色高密度聚乙烯（HDPE）管槽，泡沫衬垫。可实现每分钟1℃降温，提高冻存细胞的存活率，从冰箱拿出来后，泡沫内衬及异丙醇也可保证逐步升温，故也可用于细胞复苏。用之前在盒夹层内注入***浓度的异丙醇，管槽可放置1-2ml冻存管或储液管18个，同时管槽支架可防止管子与酒精接触，以防由于毛细作用而造成污染，或弄掉标签。细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃，后再放置到液氮槽中长期保存。苏州CellHome程序冻存盒批发杭州科默斯科技有限公司诚信致专，恒久品质。

箱中孵育 2-4min；

孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，如还有部分细胞为消化下

可在生物安全柜内用移液管吸起消化液，吹打培养平面；

向消化下细胞的培养瓶中加入 1ml 含血清的完全培养基终止消化，然后将培养

瓶中的液体转入 15ml 离心管中，300g 离心 5min；

离心完成后，弃上清，用 0.5mlFBS 重悬细胞，再加入 0.5ml 冻存液，用移液

管充分混匀，之后转入 1.8ml 冻存管中；

将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

第二天，取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存。

进一步的，冻存盒体2和冻存盒盖3均为圆柱形结构，冻存盒体2的直径尺寸与冻存盒盖3的直径尺寸相配合。

进一步的，凹槽101结构、第二凹槽201结构和第三凹槽301结构均为柱形槽结构；凹槽101的开口直径尺寸与冻存盒体2的外径尺寸相配合；第二凹槽201的开口直径尺寸与第三凹槽301的开口直径尺寸相配合。

进一步的，保温层5结构为棉花材质材料板。

进一步的，支撑冻存架4为泡沫材质的架板；支撑冻存架4为圆柱型结构架板。

下面为本实用新型的具体实施例：

支撑冻存架4装配在冻存盒体2的第二凹槽201内，冻存盒盖3装配在冻存盒体2开设第二凹槽201的端面上，第二凹槽201与第三凹槽301相连通，保温层5装配在第二凹槽201和第三凹槽301内，冻存盒体2装配在底座支撑板1的凹槽101内。

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低温冻存技巧冷冻凝固的过程中，水分会在0℃~-20℃区间形成不同形状的结晶在细胞冻存时“降温速度、冰晶形成量和细胞渗透压改变程度”是冻存成功与否的重要关键。降温速度慢：冰晶由细胞外开始形成，造成胞外渗透压变小，细胞内水份移动至细胞外造成细胞脱水。降温速度快：水分流动时间短，细胞内外渗透压改变程度小，但大量水分留在细胞内造成大量胞内冰晶形成，使得胞器损坏。这些都可能引起细胞损伤、凋亡或坏死，也可能造成复苏后细胞存活率低、细胞形态改变、细胞功能丧失、基因变异等现象。由此可知，适合的冻存条件为“在增加细胞渗透压稳定性的溶液中，以慢到能减少胞内冰晶形成，但也足够快到能预防细胞脱水的降温速度冻存细胞”。杭州科默斯科技有限公司待人热枕，办公快勤。苏州CellHome程序冻存盒批发

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工作原理：首先冻存盒本体3采用酚醛泡沫材料，轻质、防火、无害，使用温度范围广，保温性能强，并且冻存盒盖1通过其下端的冻存盒盖连接块2与冻存盒本体3上的连接卡槽5相互咬合连接，增强了密封性，整体的保温效果好，确保运输过程中冷气不会快速流失造成细胞变质的问题，同时采用对称设置的2个分隔板12与分隔板固定卡槽14嵌入式安装，将冻存管摆放架6划分为三个不同的区域，便于在冻存管插孔18中摆放不同孔径规格的冻存试管，并且由四个相同形状大小的摆放架通过导向柱7组合而成冻存管摆放架6，便于进行安装的同时可调节冻存管摆放架6的整体高度，可针对不同高度的冻存试管进行保存，提高了整体的功能性。苏州CellHome程序冻存盒批发

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