蛋白质的标记:在体外诊断应用领域,通常采用抗原或抗体与免疫金结合制备免疫金结合物。采用单克隆抗体或多克隆抗体,是影响抗体标记的因素之一。虽然诊断产品中大多数抗体标记采用IgG抗体,但IgM,中国澳门胶体金免疫层析读数仪参考价格、IgE和IgA抗体也可以成功标记上胶体金。标记时,进一步必须考虑抗体的亚型。在鼠抗IgG亚型中,例如IgG1亚型成功率高,而IgG3亚型被证实有技术难度。将抗原标记胶体金也面临技术难题,中国澳门胶体金免疫层析读数仪参考价格。将常见的抗原标记上胶体金比较容易。但是受抗原与胶体金结合方式的影响,金标记覆盖的蛋白反应决定簇小于50%时才能高成功率制备出标记物,中国澳门胶体金免疫层析读数仪参考价格。因此,考虑蛋白结合金的方式对标记开发人员非常重要。 免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。中国澳门胶体金免疫层析读数仪参考价格
应用在制备免疫金结合物的特异性抗体的稳定性主要取决于检测试验的技术条件。对于侧向层析分析,比较好的抗体形式是采用一般的单克隆配对。在这类检测分析中,一种单克隆抗体被标记胶体金作为指示剂,而另一种被固定于硝酸纤维素膜上作为捕获剂。每种抗体对于抗原表面的不同反应决定簇都应该是特异识别,并且这些抗原决定簇在空间结构上距离较远。多克隆抗体也可以被使用,但至少是必须经过protein-A柱层析纯化。在多数情况下,抗体经亲和层析纯化后能制备出具有较高灵敏度和特异性的结合物。这当然取决于符合试验检测可接受交叉反应的技术要求。亲和层析纯化硫酸铵沉淀法或DEAE纯化的血清,含有大量的杂蛋白将竞争性结合胶体金颗粒表面的结合位点。这些杂蛋白拥有高含量的控制蛋白与胶体金结合的三种氨基酸残基,很容易与裸露的胶体金颗粒结合。出现这种情况时,检测系统中指示剂的灵敏度水平降低。如果采用经A蛋白或G蛋白柱层析纯化的抗体,然后IgG片段中可能含有大量的非特异性的IgG,而不是需要的特异性IgG.所有的IgG将与胶体金结合,结果可能是低灵敏度。 安徽手持式胶体金读数仪代理商测量原理:反射光谱测试。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、酶、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合,因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。 免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中,这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色。
胶体金标记抗体技术:建立于20世纪70年代初,因胶体金液呈樱桃红色,故标记抗体后进行免疫染色,可直接光镜观察。金颗粒的电子密度相当高,电镜下清晰可辨。因此近年来该技术被广泛应用于生物学和医学各领域的电镜研究,自20世纪80年代开始,有取代免疫酶细胞化学电镜技术之趋势。该技术的主要优点:①省时.程序较酶标抗体法简单;②不需H2O2等处理,对组织细胞超微结构保存较好;③金颗粒电子密度高,电镜下容易识别,且易于同其他免疫反应产物区别;④可与酶标抗体或铁蛋白标记抗体等相结合进行双标记染色,研究两种不同抗原在超微结构水平的定位;⑤也可用不同直径的金颗粒标记不同的抗体,研究两种以上抗原的共存;⑥因抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少与抗原的量呈正相关,故可用于组织细胞抗原的半定量分析;⑦将胶体金标记的一抗体直接加入培养液中,利用培养细胞具有吞饮作用的特点,可进行培养细胞内的抗原定位研究;⑧金颗粒具有较强激发电子能力,故也可用于扫描电镜对细胞表面抗原或一些受体的定位观察;⑨胶体金液无毒,对人体亦无损伤。因此,胶体金标记抗体染色技术是目前免疫电镜技术很常用的理想染色方法。应能区分反射率差值不大于0.01的一对质控条。
金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体,(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。金标为一种催化剂,经还原剂(如对苯二酸)处理,将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银,沉淀在每个金颗粒的周围,银沉淀在光镜下可清楚地显示。滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验,也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜,再用金标记抗体或抗原进行快速测定。临床应用的有两种方法:金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。具体讲即用两个人HCG—β单克隆抗体,一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上,另一抗体结合于金溶胶颗粒表面。尿中HCG先与NC膜上的抗体-结合,然后再与金标单抗溶液反应,形成抗体一HCG一金标抗体的加心式复合物.红色的金斑点.可将测试结果实时传送至网络云端。中国香港单通道胶体金读数仪
适用于胶体金免疫层析试纸条样品的检测。中国澳门胶体金免疫层析读数仪参考价格
提到胶体金快速诊断技术,不得不首先提到POCT。在临床医学检测技术中,POCT(point of care testing,简称 POCT)是指任何由医院专业人士或非专业人员,在检测中心以外进行的检测,简称为即时检验。它使烦琐的检验过程得以简化,取代了需要较高维护成本的传统仪器设备。近年来,随着微加工技术的发展和生物学领域的要求,发展易于操作、检测信号易于判断、试剂消耗量少、反应时间、自动化程度更高、仪器小型易携带、可实现高通量、大规模的检测的POCT快速诊断技术已成为国内外研究的热点。中国澳门胶体金免疫层析读数仪参考价格
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