胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的,其基本原理与免疫渗滤技术相同。由于其稳定性好、安全、简便,且不需任何仪器设备等优点,被应用于医学检测,江西金标胶体金读数仪批发价、农产品农药兽药残留、进出口产品病原微生物检测等领域。免疫层析技术在层析材料上发生的免疫反应,具备免疫反应的高特异性、高效率性、高亲和性的特点。具体过程含有待测物的样品溶液通过纤维层析材料的毛细作用沿着层析材料上移,与固定在层析材料上的针对待测物的受体(抗原或抗体)结合并发生特性免疫反应。在该过程中,抗原抗体复合物不断被积累富集,通过酶反应标记物或直观可视标记物(如胶体金)使之显色,江西金标胶体金读数仪批发价,从而达到检测目标物质的目的,江西金标胶体金读数仪批发价。测试质控条,各通道测量结果相对极差≤5%。江西金标胶体金读数仪批发价
从亲和层析柱上洗脱下的高亲和抗体应该是高亲和抗体,从而可以产生高特异性的胶体金结合物。这些抗体可能需要进一步的处理以避免交叉反应。虽然亲和纯化法耗费大量的时间、经费、血清,但是通过该方法可以获取任何免疫分析必需的关键原料——高质量的结合物。抗原的标记成功制备抗原标记物依靠两个因素:控制抗原与胶体金颗粒联接的三种氨基酸残基的空间位置和抗原大小。大多数的抗原标记物是被使用在快速检测试纸上,例如血清的双抗体夹心法或竞争法检测。在这种情况下,通常选择40nm胶体金颗粒。直到近期,研究人员发现,40nm胶体金颗粒标记的蛋白分子量下限为30KD.然而在某些条件下,通过先进的标记技术可以将该限制降低到一半至15KD.使用这些小颗粒标记的主要限制是被标记蛋白必须包含足够数量的赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸残基。抗原常不含有足够的半胱氨酸残基,以至抗原和胶体金颗粒之间的结合力相对较弱且容易断裂,尤其在样本中存在高亲和力的抗体时。对于分子量低于30KD的抗原,通常采用其他技术方法,例如标记较小的胶体金颗粒。在检测线处由于胶体金颗粒过小使得可见度低很可能导致灵敏度降低。 西藏金标免疫层析读数仪代理商测试质控条,相对极差≤5%。
标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合:将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/LK2CO3调pH至9.0,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤:①用0、1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH(标记SPA时调到pH6.0)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml),搅拌2~3分钟。③加入5ml1%PEG20000溶液。④于10000~100000g离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。⑤将沉淀悬浮于一定体积含0.2~0.5mg/mlPEG20000的缓冲液中,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=1.5左右为宜,以0.5mg/ml叠氮钠防腐,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含0.1%BSA的缓冲溶液洗 通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为8.2,以A蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0
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继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)之后,一种固相标记免疫测定技术--免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique, ICG)逐渐发展起来。它是以胶体金作为标记物,利用抗原抗体特异性反应,对抗原或抗体物质进行定性乃至定量研究的标记技术。近年来,该技术因其操作简便、观察直观、灵敏度高、价格低廉等优点在医学、动植物检疫以及食品安全监督等各领域均得到了多方面的应用。胶体金即金的水溶液,是指分散相粒子直径在1-100 nm的金溶胶。由氯化金溶液在还原剂作用下,金离子还原成金原子,从而凝合形成特定大小的金颗粒,因其中正负离子组成胶粒的双电子层结构,从而使溶胶处于稳定状态,故称胶体金。 在反射率范围为[0.2,0.8]的线性范围内,线性相关系数|r|≥0.990。山西手持式胶体金读数仪在线议价
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蛋白质适用量的选择:胶体金与标记蛋白用量之比的确定:根据待标记蛋白的要求,将胶体金调好pH之后,分装10管,每管1ml.将标记蛋白(以IgG为例)以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml~50µg/ml,分别取1ml,加入上列金胶溶液中,混匀。对照管只加1ml稀释液。5min后,在上述各管中加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2h,观察结果。结果观察,对照管(未加蛋白质)和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管,均呈现出由红变蓝的聚沉现象;而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量,即为该标记蛋白质的低用量,在实际工作中,可适当增加10%~20%。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后,分别取0.1ml(含蛋白质5~40ug)加到1ml胶体金溶液中,另设一管不加蛋白质的对照管,5分钟后加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2小时,不稳定的金溶胶将发生聚沉,能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10%即为标记蛋白量。 江西金标胶体金读数仪批发价
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