蛋白质适用量的选择:胶体金与标记蛋白用量之比的确定:根据待标记蛋白的要求,将胶体金调好pH之后,分装10管,每管1ml.将标记蛋白(以IgG为例)以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml~50µg/ml,分别取1ml,加入上列金胶溶液中,混匀。对照管只加1ml稀释液,西藏金标免疫层析读数仪代理商。5min后,在上述各管中加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2h,观察结果。结果观察,对照管(未加蛋白质)和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管,均呈现出由红变蓝的聚沉现象;而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量,即为该标记蛋白质的低用量,在实际工作中,可适当增加10%~20%,西藏金标免疫层析读数仪代理商。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后,分别取0.1ml(含蛋白质5~40ug)加到1ml胶体金溶液中,另设一管不加蛋白质的对照管,西藏金标免疫层析读数仪代理商,5分钟后加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2小时,不稳定的金溶胶将发生聚沉,能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10%即为标记蛋白量。 内置大容量存储器,检测结果自动存于仪器内部存储器中。西藏金标免疫层析读数仪代理商
免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3~15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究,主要包括:①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体,分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角,区分不同的标记,能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚,溶胶颗粒增大、沉降,光散射随之发生变化,溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离,得到的区带转移至硝酸纤维素膜,与特异性的抗体保温后,再与胶体金标记物温育,根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法,灵敏度可低至0.1ng。5、胶体金在肉眼水平的应用--胶体金免疫结合试验江西金标胶体金读数仪批发价应能区分反射率差值不大于0.01的一对质控条。
标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合:将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/LK2CO3调pH至9.0,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤:①用0、1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH(标记SPA时调到pH6.0)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml),搅拌2~3分钟。③加入5ml1%PEG20000溶液。④于10000~100000g离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。⑤将沉淀悬浮于一定体积含0.2~0.5mg/mlPEG20000的缓冲液中,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=1.5左右为宜,以0.5mg/ml叠氮钠防腐,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含0.1%BSA的缓冲溶液洗 通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为8.2,以A蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0
支持所有金标项目定性、定量及半定量检测;ID卡加密与授权,内置浓度曲线及批号,保护试剂厂家信息;CT线位置可自定义识别,支持线宽及线间距设定,支持实时显示检测曲线;内置大容量存储数据库,可随时分类查询已测项目;支持医院通用数据库接口,支持LIS系统,内置USB接口,支持可扩展外设;可内置条形码识别模块,可加装二维码识别模块自动准确识别CT线位置,纠错范围可达 ±3mm;定制机型可内置充电电池;整机支持按客户要求定制。 测量原理:反射光谱测试。
常用的免疫胶体金检测技术: (1)免疫胶体金光镜染色法 细胞悬液涂片或组织切片,可用胶体金标记的抗体进行染色,也可在胶体金标记的基础上,以银显影液增强标记,使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面,可明显增强胶体金标记的敏感性。 (2)免疫胶体金电镜染色法 可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合,然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。 斑点免疫金渗滤法 (3)应用微孔滤膜(如膜)作载体,先将抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。 (4)胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,当移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测带上,可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。功能丰富,支持 急诊插入检测。湖北读数仪报价
层析法免疫胶体金检测试剂是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式。西藏金标免疫层析读数仪代理商
金标半定量:1、DIGFA:可用标准色阶对比法及质控标准对照法。标准色阶对比法是以与被测物浓度相对应的深浅不同的色带板与被测反应板显色斑点对比估计被测物浓度;质控标准对照法是以质控品同时测定对比色泽半定量。2、DIGCA:可用质控线对比法及多条测定线法。质控线对比法质控线色泽为临床临界浓度显色。多条测定线法在NC膜上置多条受体线(抗体或抗原),显色线条数与被测物浓度相关,或显色线第几条与被测物浓度达到多少浓度相关。 西藏金标免疫层析读数仪代理商
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