用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、酶、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合,因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。 免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,浙江自动化读数仪,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中,浙江自动化读数仪,这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,浙江自动化读数仪,称之为免疫金银染色。整机支持按客户的要求定制。浙江自动化读数仪
继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)之后,一种固相标记免疫测定技术--免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique, ICG)逐渐发展起来。它是以胶体金作为标记物,利用抗原抗体特异性反应,对抗原或抗体物质进行定性乃至定量研究的标记技术。近年来,该技术因其操作简便、观察直观、灵敏度高、价格低廉等优点在医学、动植物检疫以及食品安全监督等各领域均得到了多方面的应用。胶体金即金的水溶液,是指分散相粒子直径在1-100 nm的金溶胶。由氯化金溶液在还原剂作用下,金离子还原成金原子,从而凝合形成特定大小的金颗粒,因其中正负离子组成胶粒的双电子层结构,从而使溶胶处于稳定状态,故称胶体金。 江苏胶体金法读数仪品牌胶体金标记 吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。胶体金免疫层析(GICA)作为一种可靠的免疫学检测技术,其特异性强、灵敏度高、简便快速、无需特殊仪器设备,在动物检验检疫实际工作中有较强应用价值。目前国内已有少量兽医用商品GICA检测条生产(如瘦肉精检测条、鸡法氏囊、猪旋毛虫和新城疫检测条等)。如果加大研究开发力度,可望将GICA技术用于各种疾病的快速诊断和检测,为实现我国动物检验检疫工作的科学化、标准化和快捷化具有重要意义。
胶体金制备大体可分为分散法和还原法两种,目前多采用还原法制备胶体金,主要包括:白磷还原法,抗坏血酸还原法,枸橼酸三钠还原法,乙醇—超声波还原法,硼氢化钠还原法和鞣酸-枸橼酸钠还原法等方法。白磷还原法制得的胶体金颗粒直径在3nm左右,颗粒大小均匀性好,但白磷易燃易爆,配置时需十分小心。枸橼酸三钠还原法在实践中常用,其工艺过程简单,重复性好,而且可通过调整溶液中枸橼酸三钠浓度,来控制胶体金颗粒大小。乙醇—超声波还原法在实践中很少应用,一方面是由于工艺过程不好控制,重复性差,另一方面是所制金颗粒较小,除了免疫组化电镜技术中用小颗粒胶体金外,免疫检测技术中所用胶体金颗粒一般在50 nm左右。硼氢化钠还原法在实践中也很少应用,一方面是由于工艺过程不好控制,重复性差,另一方面是所制金颗粒较小,除了免疫组化电镜技术等研究试验使用外,金标免疫检测技术中很少使用。鞣酸-枸橼酸钠还原法为常用方法之一,可通过鞣酸的浓度来控制胶体金颗粒大小。但要注意:鞣酸溶液一定要避光保存,温度必须控制在60℃,否则会影响胶体金的均一性。能快速进行对目标因子及蛋白含量、食品添加剂及保化品类等多种安全因素的快速筛查,检测快速、结果准确。
蛋白质适用量的选择:胶体金与标记蛋白用量之比的确定:根据待标记蛋白的要求,将胶体金调好pH之后,分装10管,每管1ml.将标记蛋白(以IgG为例)以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml~50µg/ml,分别取1ml,加入上列金胶溶液中,混匀。对照管只加1ml稀释液。5min后,在上述各管中加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2h,观察结果。结果观察,对照管(未加蛋白质)和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管,均呈现出由红变蓝的聚沉现象;而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量,即为该标记蛋白质的低用量,在实际工作中,可适当增加10%~20%。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后,分别取0.1ml(含蛋白质5~40ug)加到1ml胶体金溶液中,另设一管不加蛋白质的对照管,5分钟后加入0.1ml10%NaCl溶液,混匀后静置2小时,不稳定的金溶胶将发生聚沉,能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10%即为标记蛋白量。 10.1寸电容大屏,超高分辨率。青海胶体金快速定量读数仪参考价格
测试质控条,相对极差≤5%。浙江自动化读数仪
胶体金标记蛋白的纯化(1)超速离心法:根据胶体金颗粒的大小,标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗兔IgG结合物可先低速离心(20nm金胶粒用1200r/min,5nm金胶粒用1800r/min)20min,弃去凝聚的沉淀。然后将5nm胶体金结合物用6000g,4℃离心1h;20nm~40nm胶体金结合物,14000g,4℃离心1h.仔细吸出上清,沉淀物用含1%BSA的PB液(含0.02%NaN3),将沉淀重悬为原体积的1/10,4℃保存。如在结合物内加50%甘油可贮存于-18℃保存一年以上。为了得到颗粒均一的免疫金试剂,可将上述初步纯化的结合物再进一步用10%~30%蔗糖或甘油进行密度梯度离心,分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。浙江自动化读数仪
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