标记：胶体金与蛋白质（IgG）的结合：将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/LK2CO3调pH至9.0，电磁搅拌IgG溶液，加入胶体金溶液，继续搅拌10min，加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5％胎牛血清（BSA）和1％聚乙二醇（分子量20KD）。加入量：5％BSA使溶液终浓度为1％；1％聚乙二醇加至总溶液的1／10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的，在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤：①用0、1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH(标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液（体积为２～３ml），四川胶体金检测读数仪厂家直销，搅拌２～３分钟。③加入5ml１％PEG20000溶液。④于10000～100000g离心30～60分钟（根据粒径大小选择不同离心条件），小心吸去上清液（切忌倾倒）。⑤将沉淀悬浮于一定体积含0.2～0.5mg/mlPEG20000的缓冲液中，四川胶体金检测读数仪厂家直销，离心沉淀后，再用同一缓冲液恢复，浓度以Ａ1cm/540nm=1.5左右为宜，以0.5mg/ml叠氮钠防腐，置4℃保存，四川胶体金检测读数仪厂家直销。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化，以含0.1％ＢＳＡ的缓冲溶液洗 通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为8.2，以Ａ蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0 支持多联卡，支持单C多T混合的多联卡。四川胶体金检测读数仪厂家直销

胶体金标记抗体技术：建立于20世纪70年代初，因胶体金液呈樱桃红色，故标记抗体后进行免疫染色，可直接光镜观察。金颗粒的电子密度相当高，电镜下清晰可辨。因此近年来该技术被广泛应用于生物学和医学各领域的电镜研究，自20世纪80年代开始，有取代免疫酶细胞化学电镜技术之趋势。该技术的主要优点：①省时．程序较酶标抗体法简单；②不需H2O2等处理，对组织细胞超微结构保存较好；③金颗粒电子密度高，电镜下容易识别，且易于同其他免疫反应产物区别；④可与酶标抗体或铁蛋白标记抗体等相结合进行双标记染色，研究两种不同抗原在超微结构水平的定位；⑤也可用不同直径的金颗粒标记不同的抗体，研究两种以上抗原的共存；⑥因抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少与抗原的量呈正相关，故可用于组织细胞抗原的半定量分析；⑦将胶体金标记的一抗体直接加入培养液中，利用培养细胞具有吞饮作用的特点，可进行培养细胞内的抗原定位研究；⑧金颗粒具有较强激发电子能力，故也可用于扫描电镜对细胞表面抗原或一些受体的定位观察；⑨胶体金液无毒，对人体亦无损伤。因此，胶体金标记抗体染色技术是目前免疫电镜技术很常用的理想染色方法。中国香港胶体金快速检测读数仪市场价**的光电一体化解决方案，保障了优良的检测重复性。

免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面，无共价键形成，标记后大分子物质活性不发生改变。3、胶体金的示踪原理金颗粒具有高电子密度的特性。金标蛋白在相应的配体处大量聚集时，在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红色或粉红色斑点。免疫金银染色：利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理，通过银颗粒的沉积，在光镜下可见抗原抗体反应的阳性部位呈现银的黑褐色。

联接机理：研究人员普遍接受的理论为，三种特异的氨基酸残基在金颗粒与蛋白质的联接作用中发挥着重要的作用。而赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸这三种氨基酸与胶体金联接的作用机理各不相同。1、赖氨酸带有较强的正电荷，因而自然吸附带负电荷的金颗粒；2、色氨酸主要通过疏水相互作用与胶体金相联接；3、半胱氨酸通过SH-与金表面以共用电子的形式形成配位键。抗体通过这几种作用力与胶体金颗粒牢固、稳定的、不易分离的结合在一起。在很大程度上，标记成功与否取决于上述三种氨基酸残基在被标记蛋白质上的结合位点。在某种情况下，氨基酸联接于蛋白质的活性部位，从而干扰蛋白质的反应活性。空间位阻的限制，当这几种氨基酸残基定位于抗体的抗原结合部位或抗原的特异抗体结合决定簇部位时，可能出现这种类型的干扰。如果被标记的蛋白质分子未做特定的处理就几乎不可能克服这种干扰。为了在免疫检测中获得较好的灵敏，这三种与标记相关氨基酸的正确结合是非常重要的。就标记抗体来说，这三种氨基酸应定位于Fc区，而对于标记抗原，它们应远离抗原的反应决定簇位置。 快捷的仪器校准方案。

胶体金在电镜水平的应用：胶体金应用电镜水平的研究早，发展快，应用多。其优点是可以通过应用不同大小的颗粒或结合酶标进行双重或多重标记。直径为3～15nm 胶体金均可用作电镜水平的标记物。3～15nm 的胶体金多用于单一抗原颗粒的检测，而直径15nm 多用于检测量较多的*染细胞。胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。单层培养中细胞内抗原的检测。组织抗原的检测。 胶体金在光镜水平的应用：胶体金同样可用做光镜水平的标记物，取代传统的荧光素、酶等。各种细胞涂片、切片均可应用。主要用于：用单克窿抗体或抗血清检测细胞悬液或培养的单层细胞的膜表面抗原。检测培养的单层细胞胞内抗原，组织中或亚薄切片中抗原的检测。 层析法免疫胶体金检测试剂是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式。四川胶体金检测读数仪厂家直销

可将测试结果实时传送至网络云端。四川胶体金检测读数仪厂家直销

胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金也是免疫电镜技术中较为理想的免疫标记物。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。四川胶体金检测读数仪厂家直销

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