胶体金免疫层析技术是２０世纪８０年代发展起来的，其基本原理与免疫渗滤技术相同。由于其稳定性好、安全、简便，且不需任何仪器设备等优点，被应用于医学检测、农产品农药兽药残留、进出口产品病原微生物检测等领域。免疫层析技术在层析材料上发生的免疫反应，具备免疫反应的高特异性、高效率性、高亲和性的特点。具体过程含有待测物的样品溶液通过纤维层析材料的毛细作用沿着层析材料上移，与固定在层析材料上的针对待测物的受体（抗原或抗体）结合并发生特性免疫反应，内蒙古读数仪代理商，内蒙古读数仪代理商。在该过程中，抗原抗体复合物不断被积累富集，通过酶反应标记物或直观可视标记物（如胶体金）使之显色，从而达到检测目标物质的目的，内蒙古读数仪代理商。免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。内蒙古读数仪代理商

蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备：胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。待标记蛋白溶液的制备将待标记蛋白预先对0.005Mol/LpH7.0NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100000g4℃离心1h，去除聚合物。待标胶体金溶液的准备以0.1Mol/LK2CO3或0.1Mol/LHCl调胶体金液的pH值。标记IgG时，调至9.0；标记McAb时，调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至9～10.由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节pH时，采用精密pH试纸测定为宜。由于盐类成分能影响金溶胶对蛋白质的吸附，并可使溶胶聚沉，故致敏前应先对低离子强度的水透析。必须注意，蛋白质溶液应确保澄清无细小微粒，否则应先用微孔滤膜或超速离心除去。一般情况下应避免磷酸根离子和硼酸根离子的存在，因为它们都可吸附于颗粒表面而减弱胶体金对蛋白质的吸附。 四川胶体金检测读数仪厂家直销胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。

免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3～15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体，分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角，区分不同的标记，能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒增大、沉降，光散射随之发生变化，溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离，得到的区带转移至硝酸纤维素膜，与特异性的抗体保温后，再与胶体金标记物温育，根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法，灵敏度可低至0.1ng。5、胶体金在肉眼水平的应用--胶体金免疫结合试验

标记方法的调试：为了开发、优化单一标记的胶体金结合物，研究人员通常制备小批量的多达60批次的不同胶体金结合物。每批次胶体金结合物在某一关键制备步骤上都与其它不同，各批次都被测试从而确定哪种标记技术的检测分析可能获得较好的反应结果。这类调试应该包括所有可以改善胶体金结合物的灵敏度、交叉反应以及潜在稳定性的技术参数。典型的测试应包含但不应限于抗体工作缓冲液、防腐剂的类型、盐度、表面活性剂含量、胶体金颗粒的尺寸、封闭剂的类型、总蛋白浓度、结合物工作缓冲液以及结合物的浓度。为了确定不同封闭剂的效果，建议考虑以下调试内容：封闭剂的类型（如酪蛋白、BSA、卵清蛋白、人血清白蛋白、PEG、非特异性IgG）；封闭剂的纯度封闭剂的含量；封闭剂对整个测试反应的兼容性。

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蛋白质的标记：在体外诊断应用领域，通常采用抗原或抗体与免疫金结合制备免疫金结合物。采用单克隆抗体或多克隆抗体，是影响抗体标记的因素之一。虽然诊断产品中大多数抗体标记采用IgG抗体，但IgM、IgE和IgA抗体也可以成功标记上胶体金。标记时，进一步必须考虑抗体的亚型。在鼠抗IgG亚型中，例如IgG1亚型成功率高，而IgG3亚型被证实有技术难度。将抗原标记胶体金也面临技术难题。将常见的抗原标记上胶体金比较容易。但是受抗原与胶体金结合方式的影响，金标记覆盖的蛋白反应决定簇小于50%时才能高成功率制备出标记物。因此，考虑蛋白结合金的方式对标记开发人员非常重要。 胶体金技术很适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。内蒙古读数仪代理商

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