胶体金制备大体可分为分散法和还原法两种，目前多采用还原法制备胶体金，主要包括：白磷还原法，抗坏血酸还原法，枸橼酸三钠还原法，乙醇—超声波还原法，硼氢化钠还原法和鞣酸-枸橼酸钠还原法等方法。白磷还原法制得的胶体金颗粒直径在3nm左右，颗粒大小均匀性好，但白磷易燃易爆，中国台湾台式胶体金读数仪品牌，配置时需十分小心。枸橼酸三钠还原法在实践中常用，其工艺过程简单，中国台湾台式胶体金读数仪品牌，重复性好，而且可通过调整溶液中枸橼酸三钠浓度，来控制胶体金颗粒大小。乙醇—超声波还原法在实践中很少应用，一方面是由于工艺过程不好控制，重复性差，另一方面是所制金颗粒较小，除了免疫组化电镜技术中用小颗粒胶体金外，免疫检测技术中所用胶体金颗粒一般在50 nm左右。硼氢化钠还原法在实践中也很少应用，一方面是由于工艺过程不好控制，中国台湾台式胶体金读数仪品牌，重复性差，另一方面是所制金颗粒较小，除了免疫组化电镜技术等研究试验使用外，金标免疫检测技术中很少使用。鞣酸-枸橼酸钠还原法为常用方法之一，可通过鞣酸的浓度来控制胶体金颗粒大小。但要注意：鞣酸溶液一定要避光保存，温度必须控制在60℃，否则会影响胶体金的均一性。胶体金技术很适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。中国台湾台式胶体金读数仪品牌

金标半定量：1、DIGFA：可用标准色阶对比法及质控标准对照法。标准色阶对比法是以与被测物浓度相对应的深浅不同的色带板与被测反应板显色斑点对比估计被测物浓度；质控标准对照法是以质控品同时测定对比色泽半定量。2、DIGCA：可用质控线对比法及多条测定线法。质控线对比法质控线色泽为临床临界浓度显色。多条测定线法在NC膜上置多条受体线(抗体或抗原)，显色线条数与被测物浓度相关，或显色线第几条与被测物浓度达到多少浓度相关。 中国台湾胶体金读数仪批发价测试质控条，各通道测量结果相对极差≤5%。

胶体金标记蛋白质影响因素：胶体金与蛋白质之间是通过正负电荷之间存在的范徳瓦尔引力相结合的，胶体金颗粒与蛋白质分子之间无共价键联系。胶体金标记蛋白质过程属于物理过程，标记体系的pH值、离子浓度及二者的比例等均可影响标记效果，一般情况下，当胶体金pH值接近或大于蛋白质等电点时，胶体金对蛋白质的吸附力强。反之，当胶体金pH值低于蛋白质等电点时，则会凝集而失去结合能力。如在标记葡萄球菌A蛋白（SPA）时，SPA等电点是pI5.1，胶体金的pH值可选择在pH5.9-6.2。标记单抗时，胶体金的pH值适宜在pH8.2。对于含有多种大分子蛋白的样品，如多价抗体的标记，实际上很难满足体系中各种蛋白分子的等电点的要求。为了取得较好的标记条件，可先将标记蛋白用低于pH9.0的缓冲液透析，胶体金的pH值调在pH9.0进行标记。影响胶体金标记蛋白质是否成功的另一个重要因素是胶体金与标记蛋白质的用量比例。通常蛋白质的用量取决于胶体金的颗粒大小，金颗粒直径越小，金颗粒所具有的总表面积就越大，可吸附蛋白质的量也就越大。

胶体金溶液是指分散相粒子直径在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色．胶体金作为标记物用于免疫组织化学始于1971年,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合.1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上，建立了间接免疫胶体金染色法。1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用。胶体金在免疫化学中的这种应用，又被称为免疫金．之后，许多学者进一步证实胶体金能稳定又迅速地吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显改变．它可以作为探针进行细胞表面和细胞内多糖、蛋白质、多肤、抗原、核酸等生物大分子的精确定位,也可以用于日常的免疫诊断，进行免疫组织化学定位，因而在临床诊断及药物检测等方面的应用已受到重视．目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力工具．在反射率范围为[0.2，0.8]的线性范围内，线性相关系数|r|≥0.990。

免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3～15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体，分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角，区分不同的标记，能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒增大、沉降，光散射随之发生变化，溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离，得到的区带转移至硝酸纤维素膜，与特异性的抗体保温后，再与胶体金标记物温育，根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法，灵敏度可低至0.1ng。5、胶体金在肉眼水平的应用--胶体金免疫结合试验支持多通道（可根据客户卡的大小定制，目前至多可以支持12通道）同时检测。浙江读数仪代理商

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标记：胶体金与蛋白质（IgG）的结合：将胶体金和IgG溶液分别以0.1Mol/LK2CO3调pH至9.0，电磁搅拌IgG溶液，加入胶体金溶液，继续搅拌10min，加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5％胎牛血清（BSA）和1％聚乙二醇（分子量20KD）。加入量：5％BSA使溶液终浓度为1％；1％聚乙二醇加至总溶液的1／10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的，在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤：①用0、1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH(标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液（体积为２～３ml），搅拌２～３分钟。③加入5ml１％PEG20000溶液。④于10000～100000g离心30～60分钟（根据粒径大小选择不同离心条件），小心吸去上清液（切忌倾倒）。⑤将沉淀悬浮于一定体积含0.2～0.5mg/mlPEG20000的缓冲液中，离心沉淀后，再用同一缓冲液恢复，浓度以Ａ1cm/540nm=1.5左右为宜，以0.5mg/ml叠氮钠防腐，置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化，以含0.1％ＢＳＡ的缓冲溶液洗 通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为8.2，以Ａ蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH7.0 中国台湾台式胶体金读数仪品牌

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