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4种动物药水提液中3种嘌呤碱HPLC法测定

对乌蛇、蟾蜍、土虫和地龙干燥粉末进行超声提取、离心分离、滤膜过滤后直接注入高效液相色谱仪中测定,紫外检测黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤含量。

一、 主要仪器和试剂

   等度液相色谱仪，配紫外检测器

   超声波清洗机            离心机：10 000 r /min

   无油真空泵              溶剂过滤器

   柱温箱                  甲醇：色谱纯

   标准品:次黄嘌呤( hypoxanthine) 、黄嘌呤( xanthine) 、腺嘌呤( adenine)

   实验室用水为超纯水

二、 色谱条件

   色谱柱：C18色谱柱，250 mm ×4.6 mm, 5μm

流动相：甲醇：水=5:95（V:V）

流速：1.0 mL /min

柱温：30 ℃

检测波长：254 nm

进样量：20μL

三、 标准试样配置

   将标准品配制成浓度为015 g/L标准储备液，逐级稀释,配制成浓度为510 ×10^{- 9}、110 ×10^{- 8}、210 ×10^{- 8}、510 ×10^{- 8}、110 ×10^{- 7}、210 ×10^{- 7}、510 ×10^{- 7}、810 ×10^{- 7} g/mL的标准系列,经0.45μm滤膜过滤后,直接注入色谱仪测

其峰高,以质量浓度c ( g/mL)对峰高y进行线性回归,得次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤线性方程分别为: y =81935 8x - 11219 7 ( r =01999 7) ; y =31242 6x +01562 5 ( r =01999 9) ; y =31951 6x - 01516 9 ( r =01999 6)。

四、 试样配置

  分别将乌蛇、蟾蜍、土虫、地龙样品粉碎、混匀、过孔径为180μm筛,准确称取样品置于试剂瓶中,加入纯净水8 mL,盖紧瓶塞,超声提取一定时间,将提取液转入离心管中,以10 000 r /min离心10 min,清液转入10 mL容量瓶中定容、摇匀。经0.45μm滤膜过滤后直接注入色谱仪测定。以保留时间定性,外标峰高法定量。

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