胶体金制备大体可分为分散法和还原法两种，目前多采用还原法制备胶体金，主要包括：白磷还原法，抗坏血酸还原法，枸橼酸三钠还原法，乙醇—超声波还原法，硼氢化钠还原法和鞣酸-枸橼酸钠还原法等方法。白磷还原法制得的胶体金颗粒直径在3nm左右，颗粒大小均匀性好，但白磷易燃易爆，配置时需十分小心。枸橼酸三钠还原法在实践中常用，其工艺过程简单，重复性好，广西胶体金免疫层析读数仪零售价格，而且可通过调整溶液中枸橼酸三钠浓度，来控制胶体金颗粒大小。乙醇—超声波还原法在实践中很少应用，一方面是由于工艺过程不好控制，重复性差，广西胶体金免疫层析读数仪零售价格，另一方面是所制金颗粒较小，除了免疫组化电镜技术中用小颗粒胶体金外，免疫检测技术中所用胶体金颗粒一般在50 nm左右，广西胶体金免疫层析读数仪零售价格。硼氢化钠还原法在实践中也很少应用，一方面是由于工艺过程不好控制，重复性差，另一方面是所制金颗粒较小，除了免疫组化电镜技术等研究试验使用外，金标免疫检测技术中很少使用。鞣酸-枸橼酸钠还原法为常用方法之一，可通过鞣酸的浓度来控制胶体金颗粒大小。但要注意：鞣酸溶液一定要避光保存，温度必须控制在60℃，否则会影响胶体金的均一性。免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。广西胶体金免疫层析读数仪零售价格

免疫胶体金的制备1、制备胶体金标记蛋白质应注意的问题（1）蛋白质的预处理。蛋白质应先对低离子强度的水透析，去除盐类成分。用微孔滤膜或超速离心除去蛋白质溶液中的细小微粒。（2）低盐浓度的缓冲液。过量盐可使金颗粒发生凝集。（3）当PH接近于蛋白质等电点或略偏碱性。蛋白质所处溶解状态较适合偶联，蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量较大。（4）蛋白质适用量的选择：能使胶体金稳定的合适蛋白量再加10％即为zui佳标记蛋白量。（5）胶体金与蛋白质偶联后，加入稳定剂，以避免产生凝集。一般选用PEG（分子量为20000）和牛血清白蛋白作稳定剂。2、常见方法（1）用0.1mol/LK2CO3或0.1mol/LHCl调节金溶胶至所需pH。（2）加入zui佳标记量的蛋白质溶液，搅拌2～3分钟。（3）加入5ml1％PEG20000溶液。（4）于10000～100000g离心，小心吸去上清液。（5）将沉淀悬浮于一定的缓冲液中，离心沉淀后，再用同一缓冲液恢复，浓度以Ａ1cm/540nm=1.5左右为宜，置4℃保存。广西胶体金免疫层析读数仪零售价格胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。

常用的免疫胶体金检测技术： （1）免疫胶体金光镜染色法 细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。 （2）免疫胶体金电镜染色法 可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。 斑点免疫金渗滤法 （3）应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。 （4）胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。

蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备：胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。待标记蛋白溶液的制备将待标记蛋白预先对0.005Mol/LpH7.0NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100000g4℃离心1h，去除聚合物。待标胶体金溶液的准备以0.1Mol/LK2CO3或0.1Mol/LHCl调胶体金液的pH值。标记IgG时，调至9.0；标记McAb时，调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至9～10.由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节pH时，采用精密pH试纸测定为宜。由于盐类成分能影响金溶胶对蛋白质的吸附，并可使溶胶聚沉，故致敏前应先对低离子强度的水透析。必须注意，蛋白质溶液应确保澄清无细小微粒，否则应先用微孔滤膜或超速离心除去。一般情况下应避免磷酸根离子和硼酸根离子的存在，因为它们都可吸附于颗粒表面而减弱胶体金对蛋白质的吸附。 可应用于海关检验检疫、环境监测、食品安全、临床诊断、药物筛选、重大疾病诊断检测等。

溶胶的聚沉现象胶粒之间存在吸引力与排斥力这对矛盾，在溶胶胶粒带电及溶剂化的情况下，排斥力成为矛盾的主要方面，溶胶稳定而不聚沉。因为某种原因使溶胶粒带电量减到很小，甚至中和其所带电荷并能去溶剂化膜，胶粒之间可在更近的距离互相接近，引力成为主要矛盾，引力超过斥力时胶粒便聚结发生聚沉。引起溶胶聚沉的原因有。(1)少量电解质对溶胶的聚沉作用少量电解质即可使溶胶聚沉，但各种电解质的聚沉能力可用聚沉值来表示。聚沉值是在一定时间内使1L某浓度的溶胶产生聚沉所需电解质的zui小物质的量(mm01)。显然，聚沉值愈小，聚沉能力愈大。聚沉值从实验中得出如下的规则：①电解质负离子对带正电的溶胶起主要聚沉作用，正离子对带负电的溶胶起主要聚沉作用；②同价离子聚沉能力几乎相等，不同价离子的聚沉能力随离子价增加而明显增加。电解质能使溶胶聚沉是由于电解质与胶粒带相反电荷离子的作用，中和了胶粒所带的一部分电荷，使胶粒电量减少，扩散层缩小，溶剂化层变薄，而当双电子层厚度缩至很小和溶剂化层变得很薄时，两个质粒间便可以更加接近，即不产生斥力，两个胶粒间因引力加大而合并的趋势增强，甚至引力占优势以致使胶粒聚结而发生聚沉。检测操作简单，一般1-3个步骤即可完成快速定量检测。广西胶体金免疫层析读数仪零售价格

能快速进行对目标因子及蛋白含量、食品添加剂及保化品类等多种安全因素的快速筛查，检测快速、结果准确。广西胶体金免疫层析读数仪零售价格

蛋白质的标记：在体外诊断应用领域，通常采用抗原或抗体与免疫金结合制备免疫金结合物。采用单克隆抗体或多克隆抗体，是影响抗体标记的因素之一。虽然诊断产品中大多数抗体标记采用IgG抗体，但IgM、IgE和IgA抗体也可以成功标记上胶体金。标记时，进一步必须考虑抗体的亚型。在鼠抗IgG亚型中，例如IgG1亚型成功率高，而IgG3亚型被证实有技术难度。将抗原标记胶体金也面临技术难题。将常见的抗原标记上胶体金比较容易。但是受抗原与胶体金结合方式的影响，金标记覆盖的蛋白反应决定簇小于50%时才能高成功率制备出标记物。因此，考虑蛋白结合金的方式对标记开发人员非常重要。 广西胶体金免疫层析读数仪零售价格

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