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1  仪器及试剂

1.1仪 器

1). 分析天平一台（精度0.1mg）；

2). 超声波清洗机一台；

3). 溶剂过滤器（含泵）一套；

4). 微量进样器（100µl）一支；

5). 离心机一台；

6). pH计一台

7). 等度高效液相色谱仪；

1.2试 剂

1). 0.1%的磷酸溶液；

2). 1%的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液

3). 磷酸缓冲液

4). 1mol/L的盐酸溶液

5). 1mol/L的氢氧化钠溶液

6). 泛酸钙标准品：含量≥99%

7). 泛酸钙标准贮备液

8). 泛酸钙标准工作液

1.3标准溶液配制

泛酸标准贮备液：准确称取已知浓度的泛酸钙标准品0.02g，置于100ml棕色容量瓶中，用0.1%的磷酸溶解，定容至刻度，摇匀。

泛酸标准工作液液：准确吸取泛酸标准贮备液用水按1:10的比例稀释，现用现配。该溶液浓度为20µg/ml。

磷酸缓冲液：称取3.12 g 二水磷酸二氢钠溶于1L水中，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为5.5，通过0.45滤膜过滤脱气使用。

2  样品制备

2.1复合预混合饲料：称取试样1-2g 或维生素预混合饲料0.25 -0.5g，精确至0.0001g，置于100 mL棕色容量瓶中。加60 mL水浸湿，摇匀，加10mL l%的二乙胺四乙酸二钠溶液混匀，置于超声波水浴上振荡提取15min。用水定容至刻度混合均匀，过滤或离心。再经0.45µm滤膜过滤，调整溶液的浓度大于1µg/mL，进样测定。

2.2浓缩饲料：称取试样2-5g ，精确至0.00 01g，置于100ml色容量瓶中。加60ml浸湿，摇匀，加10ml l%二乙胺四乙酸二钠溶液棍匀，置于超声波水浴上振荡提取15 min。提取液若出现混浊，需用几滴氢氧化钠溶液和盐酸溶液调节pH至4.5左右，至溶液澄清(用试纸显示)沉淀蛋白质，用水定容至刻度，过滤或离心。再经0.45µm滤膜过滤，进样测定。

3  色谱条件

色谱柱： C18色谱柱　150mm×4.6mm×5μm；

流动相：磷酸缓冲溶液；

流速：1.0ml/min；

温度：室温；

进样量：20μL；

检测波长：200nm。

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