>> 当前位置:首页 - 产品 - 江苏直销蛋白纯化系统上门安装 苏州英赛斯智能科技供应

江苏直销蛋白纯化系统上门安装 苏州英赛斯智能科技供应

信息介绍 / Information introduction

三、蛋白质分子量的测定 蛋白质分子量测定的方法很多,目前常用的方法有以下几种。 3.1 凝胶过滤法 凝胶过滤法测定蛋白质分子量的原理如“分离纯化方法”中所 述。一定型号的凝胶颗粒上具有一定大小的孔隙,只允许较小的分子进入胶粒,江苏直销蛋白纯化系统上门安装,而大于孔隙的分子则不能进入胶粒而被排阻在胶粒外面。用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质先被洗脱下来,随后能够进入颗粒的蛋白质也按分子量大小而先后被洗脱下来,分子量越小的越后被洗脱下来。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,江苏直销蛋白纯化系统上门安装,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准进行层析分析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行层析分析,江苏直销蛋白纯化系统上门安装,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量来。江苏直销蛋白纯化系统上门安装

蛋白质分离纯化步骤(二) 2.2 蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。 2.3蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法: 1. 等电点沉淀法 不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。 2. 盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。 3. 有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、**,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作.江苏直销蛋白纯化系统上门安装

蛋白质分离纯化步骤(二) 2.4 样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。 1. 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析(gel-filtration chromatography)又称为分子排阻层析或分子筛层析。它是将葡聚糖凝胶(Sephadex)装入一个柱子中,制成凝胶柱。这种凝胶颗粒具有网状结构,不同类型凝胶的网孔大小不同。当把蛋白质混合样品加到凝胶柱中时,比凝胶网孔小的蛋白质可进入网孔内,而大于网孔的分子则不能进入被排阻在凝胶颗粒之外。当用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质直接通过凝胶之间的缝隙先被洗脱下来,而比网孔小的蛋白质可连续不断地进入网孔内。这样的小分子不但流经的路程长,而且受到来自凝胶内部的阻力也很大,所以蛋白质越小,从柱子上洗脱下来所需时间越长。由于不同蛋白质的分子大小不同,进入网孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脱所用体积及时间不同,从而达到分离的目的。

三、蛋白质分子量的测定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定分子量 蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子大小、所带电荷的量以及分子形状。而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与此不同的是在样品及电泳缓冲液中加入了十二烷基***钠(sodium dodecylsulfate,SDS)。SDS是一种阴离子去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚基。当蛋白质样品中加入SDS(一般加入量为0.1%)后,SDS与蛋白质分子结合,使蛋白质分子带上大量的负电荷,这些电荷量远远超过蛋白质分子原来所带的电荷量,因而掩盖了不同蛋白质之间的电荷差异。所有结合SDS的蛋白质-SDS复合物的形状近似于长的椭园棒,它们的短轴是恒定的,而长轴与蛋白质分子量的大小成正比。这样,消除了蛋白质之间原有的电荷和形状的差异,电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小。 进行凝胶电泳时,常常用一种染料作前沿物质,蛋白质分子在电泳中的移动距离和前沿物质移动的距离之比值称为相对迁移率,相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图,得到标准曲线。将未知蛋白质在同样条件下电泳,根据测得的样品相对迁移率,从标准曲线上便可查出其分子量。

三、蛋白质分子量的测定 3.3 沉降法 沉降法又称超速离心法。蛋白质溶液在受到强大的离心力作用时,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质分子的大小、密度和分子形状有关,也与溶剂的密度和粘度有关。蛋白质颗粒在离心场中的沉降速度用每单位时间内颗粒下沉的距离来表示。 在离心场中,蛋白质分子所受到的净离心力(离心力减去浮力)与溶剂的摩擦力平衡时,每单位离心场强度的沉降速度称为沉降系数(Sedimentation Coefficient)。国际上采用Svedberg单位作为沉降系数的单位,用S表示,以纪念超速离心法的创始人,瑞典***的蛋白质化学家T.Svedberg。一个Svedberg单位(或直接称一个S)为1×10—13s。蛋白质的沉降系数大约在1×10—13~200×10—13s范围内,即1S~200S。北京专业蛋白纯化系统制造厂家

江苏直销蛋白纯化系统上门安装

由于在重大工程、工业装备和质量保证、基础科研中,仪器仪表都是必不可少的基础技术和装备重点,除传统领域的需求外,新兴的智能制造、离散自动化、生命科学、新能源、海洋工程、轨道交通等领域也会产生巨大需求。中国的新型工业化进程,信息化和工业化融合的进一步加深,带动各个工业领域对于蛋白纯化色谱系统,凝胶净化色谱系统,制备液相色谱,柱塞泵等产品的需求。中国仪器仪表行业目前正处于高速发展阶段,需要与之相适应的机器人与自动化设备、机械电子设备的研发、生产、销售及技术咨询;光学检测设备、光电产品研发、制造、销售;实验室设备、仪器仪表的研发、制造、销售及提供相关的技术咨询和售后服务;自营和代理各类商品及技术的进出口业务(限定企业经营或禁止进出口的商品和技术除外)。(依法需经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动)产品营销模式相互配合。“互联网+”、大数据、020、万物互联网、P2P、分享经济等热门词汇的出现,各个行业制定相应的措施来顺应时代的经济发展,以争取更大的发展市场。而互联网的出现也为仪器仪表行业参与国际竞争提供了机会,有利于加工企业实现技术创新升级。江苏直销蛋白纯化系统上门安装

苏州英赛斯智能科技有限公司致力于仪器仪表,是一家生产型公司。公司业务涵盖蛋白纯化色谱系统,凝胶净化色谱系统,制备液相色谱,柱塞泵等,价格合理,品质有保证。公司从事仪器仪表多年,有着创新的设计、强大的技术,还有一批**的专业化的队伍,确保为客户提供良好的产品及服务。英赛斯秉承“客户为尊、服务为荣、创意为先、技术为实”的经营理念,全力打造公司的重点竞争力。

免责声明: 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息,均来源于其对应的用户,本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题,请及时与本网联系,我们将核实后进行删除,本网站对此声明具有最终解释权。

查看全部介绍
推荐产品  / Recommended Products