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山东直销蛋白纯化系统上门安装 苏州英赛斯智能科技供应

信息介绍 / Information introduction

三、蛋白质分子量的测定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定分子量 蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子大小、所带电荷的量以及分子形状。而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与此不同的是在样品及电泳缓冲液中加入了十二烷基***钠(sodium dodecylsulfate,SDS)。SDS是一种阴离子去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚基。当蛋白质样品中加入SDS(一般加入量为0.1%)后,SDS与蛋白质分子结合,使蛋白质分子带上大量的负电荷,这些电荷量远远超过蛋白质分子原来所带的电荷量,因而掩盖了不同蛋白质之间的电荷差异。所有结合SDS的蛋白质-SDS复合物的形状近似于长的椭园棒,它们的短轴是恒定的,而长轴与蛋白质分子量的大小成正比。这样,山东直销蛋白纯化系统上门安装,山东直销蛋白纯化系统上门安装,消除了蛋白质之间原有的电荷和形状的差异,电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小,山东直销蛋白纯化系统上门安装。 进行凝胶电泳时,常常用一种染料作前沿物质,蛋白质分子在电泳中的移动距离和前沿物质移动的距离之比值称为相对迁移率,相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图,得到标准曲线。将未知蛋白质在同样条件下电泳,根据测得的样品相对迁移率,从标准曲线上便可查出其分子量。山东直销蛋白纯化系统上门安装

三、蛋白质分子量的测定 蛋白质分子量测定的方法很多,目前常用的方法有以下几种。 3.1 凝胶过滤法 凝胶过滤法测定蛋白质分子量的原理如“分离纯化方法”中所 述。一定型号的凝胶颗粒上具有一定大小的孔隙,只允许较小的分子进入胶粒,而大于孔隙的分子则不能进入胶粒而被排阻在胶粒外面。用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质先被洗脱下来,随后能够进入颗粒的蛋白质也按分子量大小而先后被洗脱下来,分子量越小的越后被洗脱下来。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准进行层析分析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行层析分析,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量来。北京专业蛋白纯化系统厂家报价

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三、蛋白质分子量的测定 3.3 沉降法 沉降法又称超速离心法。蛋白质溶液在受到强大的离心力作用时,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质分子的大小、密度和分子形状有关,也与溶剂的密度和粘度有关。蛋白质颗粒在离心场中的沉降速度用每单位时间内颗粒下沉的距离来表示。 在离心场中,蛋白质分子所受到的净离心力(离心力减去浮力)与溶剂的摩擦力平衡时,每单位离心场强度的沉降速度称为沉降系数(Sedimentation Coefficient)。国际上采用Svedberg单位作为沉降系数的单位,用S表示,以纪念超速离心法的创始人,瑞典***的蛋白质化学家T.Svedberg。一个Svedberg单位(或直接称一个S)为1×10—13s。蛋白质的沉降系数大约在1×10—13~200×10—13s范围内,即1S~200S。

蛋白质分离纯化步骤(二) 2.2 蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。 2.3蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法: 1. 等电点沉淀法 不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。 2. 盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。 3. 有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、**,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作.样品前处理化学分析蛋白纯化系统上门维修

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