在实施例1中的引物和探针的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测，25μl实时荧光定量pcr的检测体系包括：模板5μl、实时荧光定量pcr反应液2×onestepu+μl(购于vazyme公司)、onestepu+μl(购于vazyme公司)、10μm-4×混合引物μl、10μm-4×混合探针μl，rna-freeh2o5μl。实时荧光定量pcr反应条件可为：反转录52℃15min；95℃2min；pcr扩增条件：95℃15s，56℃30s，45个循环。在每个循环的退火结束时进行荧光信号检测。2)用得到的ct值或荧光信号的变化实现对cav-ii、cpv、cdv和cpiv定性检测，不同荧光通道出现标准的“s”型扩增曲线，表明待测样品中含有cav-ii、cpv、cdv和cpivbingdu，再根据荧光信号的强度和步骤，治好细小病菌欢迎来电，得出待测样品中所含有cav-ii、cpv、cdv和cpivbingdu的拷贝数，实现定量检测。3)具体判定方法：①若待测样品在hex通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpivbingdu核酸阳性；②若待测样品在fam通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，治好细小病菌欢迎来电，则结果判定为cpvbingdu核酸阳性；③若待测样品在cy5通道中的扩增曲线均为标准的s型曲线，治好细小病菌欢迎来电，且ct值≤32，则结果判定为cdvbingdu核酸阳性。狗狗为什么会得细小？治好细小病菌欢迎来电

    细小bingdu是一种无囊膜，单链，DNAbingdu。可通过较小的抗原转移与自然突变而染上犬科动物。犬细小病（CPV）毒病是由犬细小bingdu染上幼犬所引起的一种急性传染病。临床上有两种表现型，出血性肠炎型以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显赫减少为主要特征；心肌炎型则以突然死亡为特征。无论哪种类型的临床表现，均以发病率高、死亡率高和传染性强为特点1977年，美国学者Eugster和Nairn较早从患出血性肠炎的犬粪便中分离得到该bingdu，其后，加拿大、澳大利亚、法国、日本等国均有此病发生的报道。1982年，我国梁士哲等**早报道了类似CPV（CanineParvovirus）所致的犬出血性肠炎；1983年，徐汉坤等正式确认本病的流行。犬细小bingdu的发现只有30年的时间，但该bingdu对犬的染上危害严重，世界各国对该bingdu生物学特性及其疫病的防制进行了大量的研究工作[1]细小bingdu属(Parvovirus)，bingdu粒子无囊膜，CPV对外界的抵抗力较强，对酒精、乙chun、氯仿有抵抗性，对温度也有一定耐受性。65℃、30秒而不失其染上性，低温长期存放对其染上性并无明显影响。在4℃～10℃存活6个月，37℃存活2周，56℃存活24小时,80℃存活15秒，在室温下保存3个月染上性*轻度下降。江汉区治好细小病菌常见问题武汉动物医院哪家好？

    A)、肠炎型：1、潜伏期为7~14天。2、一般先呕吐后腹泻，粪便呈黄色或灰黄色，内含多量粘液和伪膜。3、病后2~3天，粪便呈番茄汁样，混有血丝，并有特殊腥味。4、病犬很快呈现脱水症状，此时病犬精神沉郁，食欲废绝，体温升至40摄氏度以上，渴欲增加。5、有的病犬到后期体温低于常温，可视黏膜苍白，尾部及后腹部常被粪便污染，严重者肛门松弛并开张。B)、心肌炎型：幼犬呼吸困难，心悸亢进，可视黏膜苍白，体质衰竭，常突然死亡。三、犬细小病du的防范措施1、本病的预防是接种疫苗，一般是与犬瘟热等传染性疾病一起采用六联疫苗或七联疫苗共免的方式;2、本病的病程快，年龄越小的犬病死率越高，早期治聊非常重要;3、心肌炎型病犬病程急剧，迅速恶化，常来不及救治即已死亡;4、肠炎型病犬若能及时合理治聊，可明显降低死亡率。一般采用犬细小病du高免血清治聊，并针对病情用葡萄糖盐水补液，应用利巴韦林抗病du，**或卡那霉素抗继发染上，同时肌注维生素K;四、参考治聊方案：1、免疫血清：早期使用可提高疗效。如果家中有多只宠物犬，一旦有犬确诊为本病，应立即给其他犬注射高免血清或康复犬血清。高免血清的用量为，康复犬血清，连用3～5天。

另一种为肠炎型，肠炎型出现症状后为发病的第二天，主要为呕吐白色泡沫或者未消化食物，腹泻，粪便为黄色半成型，带有腥味，部分肠炎型狗患者腹泻后为白色的稀便，少数极差的狗患者初期就会出现便便为透明状液体，带有血丝。根据本人经验应该是肠粘膜脱落。随着病情发展呕吐愈发严重，呕吐白色泡沫，便便为咖啡色或者绿色果冻状便便，腥臭。然后发展为明显的特征：喷状粪便，腥臭极其重，颜色为咖啡色或者绿色或者番茄色，为肠粘膜脱落，肠道出血引起。肠炎型细小重要的是对症下药，肠炎型细小会引起酸中毒，肠道大出血，肠道吸收，所以必须尽快酸中毒，止血。酸中毒主要是医用碳酸氢钠，止血为止血敏针剂或者其他止血。如果对症下药，缓解症状，病好的几率还是很大的，而且会终身免疫犬细小。酸中毒（解决为奥美拉错注射液，辅助为6542注射液）引起原因请看下面。

酸中毒引起原因：酸中毒要是因为狗狗本身长期未进食，胃酸空分泌，腐蚀到了胃壁，胃壁失去了粘膜的保护，结果导致酸性物质被吸收，引发酸中毒，这只是其中一种原因，还有一部分原因。但是这是主要的。 武汉瑞鹏宠物医院！！

述的引物和taqman探针组的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测，检测结束后，以各标准品的浓度log值(x轴)对其相应ct值(y轴)作图，绘制标准曲线；2)提取待测样品的基因组dna或rna，以提取的基因组dna或rna为模板，在上述的引物和taqman探针组的引导下进行四重实时荧光定量pcr检测；3)用得到的ct值或荧光信号的变化实现对犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的定性检测，再根据荧光信号的强度和步骤1)中的标准曲线，得出待测样品中所含犬腺bingduii型、犬细小bingdu、犬瘟热bingdu和犬副流感bingdu的拷贝数，实现定量检测。上述步骤1)和步骤2)中的25μl实时荧光定量pcr检测体系包括：模板5μl、实时荧光定量pcr反应液2×onestepu+μl(购于vazyme公司)、onestepu+μl(购于vazyme公司)、10μm-4×混合引物μl、10μm-4×混合探针μl，rna-freeh2o5μl；上述步骤1)和步骤2)中的四重实时荧光定量pcr检测条件为：反转录52℃15min，95℃2min；pcr扩增95℃15s，52℃30s，45个循环。上述步骤3)中的判定方法为：若待测样品在cpiv-p的5’端所标记的荧光报告基团所对应的通道中的扩增曲线为标准的s型曲线，且ct值≤32，则结果判定为cpivbingdu阳性。武汉狗狗动物医院！！江汉区治好细小病菌常见问题

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    犬接触细小病du后在3-14天内出现体症，平均发病时间为5-7天。临床症状包括：食欲下降、沉郁、发热、呕吐、腹泻、粪便带有犬细小病du特有的腥臭味。成年犬（十二个月以上的犬）发病率很低，如果不是纯度很高的犬或者近亲交配的成年犬一般不会出现明显症状，*表现为粪便带有一定腥臭味，食欲减退，如果无加重情况可无需治聊。染上犬细小病du后的犬，在临床上可分为肠炎型和心肌炎型。肠炎型：自然染上潜伏期为7天～14天，病初表现发热，体温可达40℃以上，精神沉郁，不食，呕吐。初期呕吐物为未消化的食物以及白色泡沫（胃酸），之后为粘液状及黄绿色液体。发病一tian以后开始腹泻。病初粪便为稀糊状或半成形状，有一定的腥臭味。随着病情发展粪便成为深绿色或黄色的果冻状。随后粪便呈番茄酱色或咖啡色，味腥臭，排便次数不定，有里急后重的症状。血便后病犬表现为眼球下陷，鼻镜干燥，全身无力，体重明显下降，同时伴有眼结膜、口腔粘膜苍白，严重的贫血症状，该病如不及时治聊可造成肠内容物的毒su吸收中毒，直至休克、死亡。偶有犬类出现以下情况：粪便为透明水状物，里面带有血丝，带有腥臭味，或者粪便为白色稀状粪便。心肌炎型：多见于40日龄左右的幼犬。治好细小病菌欢迎来电

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