冻存细胞时要缓慢冷冻，程序降温，以提高细胞的存活率。目前普遍的做法是采用程序降温仪或程序降温盒，采用程序降温仪价格昂贵、操作繁琐，而程序降温盒在生物学实验室中使用，是细胞冻存盒类产品的经典实验耗材之一。程序降温盒包括盒盖、盒身和管槽，管槽置于盒身内，盒盖盖于盒身上且与盒身螺纹配合，用之前在盒身与管槽的夹层内装入异丙醇，能为成功冷冻保存细胞提供精确和良好重复性的冷冻率，可的提高细胞的存活率，江西细胞冻存盒图片。但是现有程序降温盒的盒盖与盒身是分离的，使用前需要进行配对标记，增加了操作程序，江西细胞冻存盒图片，使用不方便；并且现有程序降温盒出入超低温冰箱时，取放也不方便，江西细胞冻存盒图片，与手接触时容易伤害到手。杭州科默斯科技有限公司规范运作、持续创新。江西细胞冻存盒图片
冻存盒肯定是先放在室温，然后放进去细胞，置于-80，利用异丙醇实现梯度降温啊。)
根据论坛里的讨论，异丙醇使用过一段时间后是要更换的，但是我一直没换过，也没发现很大问题。
经验2：我们实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。
经验3：异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性0液体。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激数据：眼睛- 兔子100 毫克/ !请注意清理!
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3.根据权利要求I或2所述的程序降温盒，其特征在于所述管槽(3)与盒身(2)螺纹配合。4.根据权利要求3所述的程序降温盒，其特征在于所述盒身(2)内下部设有泡沫衬垫 (5)。5.根据权利要求4所述的程序降温盒，其特征在于所述盒盖(I)为塑料盒盖，所述盒身(2)为透明塑料盒身，所述管槽(3)为塑料管槽，所述连接带(4)为塑料连接带。**摘要本实用新型公开了一种程序降温盒，包括盒盖、盒身和管槽，所述管槽置于盒身内，所述盒盖盖于盒身上且与盒身螺纹配合，还包括连接带，所述连接带一端与盒盖连接，另一端与盒身连接；本实用新型设置了连接盒盖与盒身的连接带，使盒盖与盒身不分离，减少了配对标记这一步骤，减少了操作程序，使用更加方便；同时，本实用新型出入超低温冰箱时，可手提连接带，减少了手的接触面积，减少或防止伤害到；另外，管槽与盒身螺纹配合，增加了密封度，防止了异丙醇挥发而导致的冻存效果变差。
低温冻存技巧冷冻凝固的过程中，水分会在0℃~-20℃区间形成不同形状的结晶在细胞冻存时“降温速度、冰晶形成量和细胞渗透压改变程度”是冻存成功与否的重要关键。降温速度慢：冰晶由细胞外开始形成，造成胞外渗透压变小，细胞内水份移动至细胞外造成细胞脱水。降温速度快：水分流动时间短，细胞内外渗透压改变程度小，但大量水分留在细胞内造成大量胞内冰晶形成，使得胞器损坏。这些都可能引起细胞损伤、凋亡或坏死，也可能造成复苏后细胞存活率低、细胞形态改变、细胞功能丧失、基因变异等现象。由此可知，适合的冻存条件为“在增加细胞渗透压稳定性的溶液中，以慢到能减少胞内冰晶形成，但也足够快到能预防细胞脱水的降温速度冻存细胞”。杭州科默斯科技有限公司行政有矩，服务无距。
请问梯度冻存盒到底怎么使用？两种方法：
1、是先把冻存盒放在室温，把细胞放在冻存盒，置于-80度？（這样的好处：细胞可以从室温开始缓慢降温）（并且，据说冻存盒的使用本来就是从20度室温开始降）
2、还是将冻存盒先放在4度降温，再将细胞放进去，放于-80？（這样的好处：常温下冻存液中DMSO对细胞损伤大，从4度开始降温比较好？） 杭州科默斯科技有限公司待人热枕，办公快勤。嘉兴低温冻存盒批发
细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降温方法是利用程序降温盒设定程序由室温降低至-80℃，后再放置到液氮槽中长期保存。程序降温盒的使用注意事项如下：实验室虽然有程序降温冻存盒，但怎么使用一直都搞不明白，我觉得是不是应该把程序降温冻存盒先从-80度移到室温放一段时间(细胞刚开始还没冻的时候就是室温)，然后把细胞放进去，再一起移到-80度，这样才能实现程序降温呢? 时间使用长了，感觉里面的液体是不是异丙醇啊，使用时间长了会不会挥发或变质什么的，要不要添加或维护一下呢，还有有一只降温盒因不小心给倾斜让液体流出了部分，要补充吗?杭州科默斯科技有限公司奉献专业，彰显魅力。江西细胞冻存盒图片
箱中孵育 2-4min；
孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，如还有部分细胞为消化下
可在生物安全柜内用移液管吸起消化液，吹打培养平面；
向消化下细胞的培养瓶中加入 1ml 含血清的完全培养基终止消化，然后将培养
瓶中的液体转入 15ml 离心管中，300g 离心 5min；
离心完成后，弃上清，用 0.5mlFBS 重悬细胞，再加入 0.5ml 冻存液，用移液
管充分混匀，之后转入 1.8ml 冻存管中；
将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；
第二天，取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存。 江西细胞冻存盒图片
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