免疫印迹法（immunoblotting ）因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southern

blot相类似，亦被称为Western blot。免疫印迹（western blotting）是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离；②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上，用非特异性，非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域；③免疫学检测，天津全自动Western Blot检测服务。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端，天津全自动Western Blot检测服务，天津全自动Western Blot检测服务，极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度，使其成为使用**的免疫化学方法之一。 天津全自动Western Blot检测服务

转膜(Transfer)

推荐在Western实验中选用PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纤维素膜比较脆，在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。

通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，比较好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。

转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量比较大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液(P0022)对膜进行染色，以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液(P0017)对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。 天津全自动Western Blot检测服务

收集蛋白样品(Protein sample preparation)

可以使用适当的裂解液，Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞**白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒

全自动单细胞western blot检测分析原理：全自动单细胞western blot分析是单细胞水平，蛋白质表达定量分析系统。系统采用**的微流控western blot芯片，通过单细胞微孔设计，采集单细胞，然后原位裂解细胞，释放蛋白，进行蛋白质电泳，将不同分子量蛋白进行分离，提高免疫学检测特异性。之后，采用**技术进行蛋白质原位捕获，使用western blot验证抗体及荧光标记二抗直接杂交，扫描仪进行芯片扫描后，分析软件对扫描结果进行深度定量分析。

Western blotting堪称蛋白质研究中的经典方法。学生物的几乎无人不晓，即使没亲手做过，也清楚其原理。经典果然是经典，30年来其操作步骤几乎没变过，依然是跑胶-转膜-封闭-孵育-检测。近两年，各大公司陆续推出了Western blotting方面的新仪器，如新型转印系统，确实能省时省力不少，但仍然不能完全克服研究人员在面临的挑战。Western

blotting仍存在重复性差、实验耗时长、无法准确定量等问题。

近日，美国proteinsimple公司推出了一种Simple Western™分析，彻底改变了整个Western blot。此分析在一台名为Simon的仪器上开展，Simon将所有实验步骤自动化，包括蛋白上样和分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据的定量分析，让研究人员从繁重的劳动中解放出来，同时避免了可能影响实验重复性的人为因素。 天津全自动Western Blot检测服务

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化工产业是国民经济的重要基础行业，与一国综合国力和人们生活密切相关。化工产业由于规模体量大、产业链条长、资本技术密集、带动作用广、与公民生活息息相关等特征，受到发达国度的高度重视。有限责任公司企业普遍把研发创新能力看作企业**重要的重点竞争力，加大研发加入、提升**水平，并积极构建开放性和国际化的创新体系。科研技术服务，应用技术服务，科研成果转化，科学产品销售宽泛应用于国民经济和****的众多领域中，成为我国化工体系中市场需求增长**快的领域之一，近年来很多产品的消费量年均增长都在10%以上。通过服务型的优化和升级，化工行业已经从初期的以“三废治理”为主，发展为包括环保产品、环境服务、洁净产品、废物循环利用，跨行业、跨地区，产业门类基本齐全的产业体系。天津全自动Western Blot检测服务

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