做实验的时候为什么要进行细胞冻存呢?细胞冻存有哪些好处呢?1. 节省实验室空间、时间,甘肃低温冻存盒批发、经费2. 若实验失败,还有重来的机会3. 确保重复实验的一致性4. 确保未来实验的连贯性但是,经常会有用户反映,甘肃低温冻存盒批发,细胞冻存与复苏遇到了问题,看似简单的一步其实并不简单,甘肃低温冻存盒批发。那么如何做好细胞冻存呢?跟随我们一起来了解一下细胞冻存时需要注意的事项和技巧吧。细胞代谢过程需要各种蛋白酶的参与,而这些蛋白酶在环境温度低于-70℃时会集体,低温贮藏的目的是通过**温使细胞代谢活动近乎停止。细胞因此进入休眠状态,使细胞“不会老”,所以可以长期保存。因为冻融过程对所有细胞和组织都是有一定伤害的,因此,需要开发出有效的技术来防止细胞死亡和损伤。▲ 细胞冻存过程低温保护剂可保护细胞不受细胞内冰冻影响,目前多采用DMSO,甘油,乙二醇和丙二醇等渗透型低温保护剂。它们的作用机制包括:自由进入细胞,取代水,使冰点下降,充当盐的二次溶剂,提高细胞膜对水的通透性。杭州科默斯科技有限公司规范运作、持续创新。甘肃低温冻存盒批发
进一步的,冻存盒体2和冻存盒盖3均为圆柱形结构,冻存盒体2的直径尺寸与冻存盒盖3的直径尺寸相配合。
进一步的,凹槽101结构、第二凹槽201结构和第三凹槽301结构均为柱形槽结构;凹槽101的开口直径尺寸与冻存盒体2的外径尺寸相配合;第二凹槽201的开口直径尺寸与第三凹槽301的开口直径尺寸相配合。
进一步的,保温层5结构为棉花材质材料板。
进一步的,支撑冻存架4为泡沫材质的架板;支撑冻存架4为圆柱型结构架板。
下面为本实用新型的具体实施例:
支撑冻存架4装配在冻存盒体2的第二凹槽201内,冻存盒盖3装配在冻存盒体2开设第二凹槽201的端面上,第二凹槽201与第三凹槽301相连通,保温层5装配在第二凹槽201和第三凹槽301内,冻存盒体2装配在底座支撑板1的凹槽101内。
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本实施例中,所述盒盖I顶部设有向上突出的连接柱11,所述连接带4的两端分别设有套环41,所述连接带4 一端的套环41外套于连接柱11且与连接柱11单自由度转动配合,另一端的套环41外套于盒身2且与盒身2单自由度转动配合。 作为本实用新型的进一步改进,所述管槽3与盒身2螺纹配合;增加了密封度,防止了异丙醇挥发而导致的冻存效果变差。本实施例中,所述盒身2内下部设有泡沫衬垫5 ;泡沫衬垫5防止管瓶与异丙醇接触,避免造成污染或在管瓶上留下痕迹。本实施例中,所述盒盖I为塑料盒盖,例如高密度聚乙烯盒盖;所述盒身2为透明塑料盒身,例如聚碳酸酯盒身;所述管槽3为塑料管槽,例如高密度聚乙烯管槽;所述连接带4为塑料连接带,例如高密度聚乙烯连接带。后说明的是,以上实施例*用以说明本实用新型的技术方案而非限制,尽管通过参照本实用新型的推荐实施例已经对本实用新型进行了描述,但本领域的普通技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离所附权利要求书所限定的本实用新型的精神和范围。
所需仪器:
-86℃超低温冰箱
离心机
生物安全柜
电动移液器
CO2培养箱
倒置显微镜
液氮罐
所需试剂:
胎牛血清(FBS)
细胞培养级 DMSO
冻存液:80%FBS+**MSO
无菌 1×PBS pH=7.2
消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
异丙醇
所需耗材:
离心管(15ml、50ml)
T-25 细胞培养瓶
一次性无菌移液管(2ml、5ml、10ml)
8ml 冻存管
程序降温盒
操作步骤:
将需要那冻存的细胞从 CO2培养箱中取出,在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,
吸弃瓶内的培养基;
向培养内加入无菌 1×PBS 3ml,之后水平放置培养瓶,旋转震荡培养瓶,使 PBS
能够浸润到培养平面上所都的面积,吸弃 PBS;
重复步骤 2 一次,之后向瓶内加入消化液 1ml,轻微震荡后放入 37℃CO2培养
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经验2:我们实验室冻存盒平时放4度,需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮,贵重的细胞尽快转移,不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的,很方便,效果也不错的。经验3:异丙醇的量是要保证的,不能低于表明的线,否则不能起到很好的程序性降温作用,我们是在4度放置,放了细胞后立马放到-80度冰箱,第二天再转移到液氮,效果很不错。异丙醇熔点:-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性0液体。注意了有可燃性!急性毒性:口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激数据:眼睛- 兔子100 毫克/ !请注意清理!杭州科默斯科技有限公司合而精进,韧而笃行。甘肃低温冻存盒批发
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本实用新型在冻存管架上设置多个容纳冻存管的柱形凹腔,一次性冷冻的细胞液较多,便于批量处理,效率较高。降温盒主体内壁固定一层保温棉,避免细胞液温度过快的下降对细胞造成的损伤,同时主体与冻存管架之间加入异丙醇后,可实现-1℃/分的冷冻率,更进一步减缓冷冻时间,实现程序化冷冻,有利于保护细胞,提高存活率。以上详细描述了本实用新型的较佳具体实施例。应当理解,本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本实用新型的构思做出诸多修改和变化。因此,凡本技术领域中技术人员依本实用新型的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案,皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。甘肃低温冻存盒批发
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