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天津水体基因组荧光定量PCR分析服务 欢迎咨询 上海朝瑞生物科技供应

信息介绍 / Information introduction

在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸:5’端标记一个报告荧光基团,天津水体基因组荧光定量PCR分析服务,3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,天津水体基因组荧光定量PCR分析服务,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,天津水体基因组荧光定量PCR分析服务,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。

在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号**扩增阶段任意位置上,但一般荧光阈值的设置是PCR反应**-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。 天津水体基因组荧光定量PCR分析服务

RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。

  RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

  溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用***反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定

  先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 上海荧光定量PCR检测服务

荧光定量PCR 实验步骤(1) 

样品RNA的抽提


①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。


②每样品加入1ml的TRIZOL试剂裂解,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。


③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。


④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。


⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。


⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用移液器反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。

有关转基因及其产品的安全性的争论在国内外愈演愈烈,各国**纷纷出台一系列的政策、法规,要求对转基因作物进行标识,有些国家对转基因的比较低含量做了限定,其阈值大小从1-5%不等。这就要求必须对转基因及其产品进行检测。 常规的检测方法多采用PCR法,如PCR-凝胶电泳、PCR-ELISA等。这些方法普遍存在着PCR产物污染、特异性不高及速度慢等问题。荧光PCR技术是一种新近发展起来的检测技术,它的应用将从根本上解决这些问题。 1.收集了国内外商品化的转基因作物品种,并通过查阅有关文献及网站初步确定了各种作物的转基因构建图; 2.于反应体系中引入UNG去污染酶,建立了无污染荧光PCR扩增体系; 3.以植物内源基因18SrRNA为靶标,设计了特异性引物和荧光探针,建立了以18SrRNA基因的扩增与否来判断核酸提取质量好坏的方法; 4.以FAM荧光素为标记,建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa为筛选目标的转基因农作物荧光PCR定性检测体系; 5.分别以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因,建立了转基因大豆及转基因玉米的荧光定量PCR检测体系。

SNP基因分型技术原理是PCR扩增含有SNP的基因组片段,主要特点是准确性高、灵活性强、通量大,主要方法是TaqMan探针法。TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。天津水体基因组荧光定量PCR分析服务

天津水体基因组荧光定量PCR分析服务

一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段、荧光信号**扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化;在平台期,扩增产物已不再呈**级增加,PCR终产物量与起始模板量之间没有线性关系,无法计算起始模板拷贝数。因此只有在荧光信号**扩增阶段,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,故选择在这个阶段进行定量分析。为了定量方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了几个重要的概念:扩增曲线、荧光阈值、CT值。天津水体基因组荧光定量PCR分析服务

上海朝瑞生物科技有限公司于2003-01-22成立,注册资本700-1000万元元,现有专业技术人员5~10人人,各种专业人员齐备。在上海朝瑞科技近多年发展历史,公司旗下现有品牌zrbiorise,SPRICELL,scienceladde等。我公司拥有强大的技术实力,多年来一直专注于1.发布科研技术 2.发布应用技术 3.发布专业专长 4.发布科研成果 5.发布我的需求 6.发布筛选检验检测服务 7.发布协同代研发服务 8.发布升级改造产品服务 9.发布实验室及仪器设备共享 10.发布培训基地共享 11.发布工厂代加工及共享车间 12.发布科研/项目团队招聘13.发布研究生婚恋 14.发布项目整包服务 15.发布资源交换业务的发展和创新,打造高指标产品和服务。上海朝瑞生物科技有限公司主营业务涵盖[ "科研技术服务", "应用技术服务", "科研成果转化", "科学产品销售" ],坚持“质量***、质量服务、顾客满意”的质量方针,赢得广大客户的支持和信赖。

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