其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,上海六色免疫组化实验服务,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。免疫组化抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。免疫组化常用染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,上海六色免疫组化实验服务,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法**常用。免疫组化操作步骤编辑一免疫组化(SP法)操作步骤1.切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行2.缓冲液洗3min/2次。3.为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分钟,上海六色免疫组化实验服务。4.缓冲液洗5min/2次。5.滴加UltraVBlock。
避免了共价连接对抗体和酶活性的损害,提高了方法的敏感性,而且节省一抗的用量。但抗酶抗体不易纯化。几点说明·一抗(假设来自种属A)的稀释度可大些,使抗体的两个Fab段均与组织抗原结合。·二抗——桥抗体(抗种属A的IgG抗体)应过量,使其Fab段一个与一抗结合,另一个则游离。·因抗酶抗体与一抗均系种属AIgG,具有相同的抗原性,所以桥抗体游离的Fab能与抗酶抗体结合,起桥作用,将其连接在与组织抗原结合的一抗上。(2)非标记抗体酶法——PAP法·与酶桥法相似,不同的是,PAP法将酶桥法的第3、4步并为1步,用PAP复合物代替;·PAP是离体制备的复合物(HRP--抗HRP)。·显色与酶桥法相同,PAP复合物中的过氧化物酶催化底物水解,形成不溶性终产物。PAP法评价·PAP法比直接法、间接法、酶桥法更敏感。特别适用于石蜡切片中微量抗原和抗原性减弱抗原的检测。–缺点:步骤较多,时间较长,不适用于临床常规检查。·由于常做石蜡切片,故可用于回顾性研究。免疫细胞化学技术亲和组织化学法·是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础。·这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位。生物素—抗生物素染色法【原理】·生物素(biotin)又称维生素H。
2. 免疫酶细胞化学技术是目前免疫组织化学研究中**常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.3. 免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究.
免责声明: 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息,均来源于其对应的用户,本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题,请及时与本网联系,我们将核实后进行删除,本网站对此声明具有最终解释权。