研究表明h9亚型aiv容易与其他病原(bingdu和细菌等)混合染上，进而给我国养禽业造成更为严重的损失；其与其它不同亚型aiv混合染上时，毒株之间容易发生基因片段重组，并产生一些不可预知的新型禽流感bingdu，进而可能引起新型禽流感bingdu的大流行。2013年以来的部分报道还表明其可为h5n6和h7n9等高致病性亚型aiv的提供内部基因。由上述报道可见，h9亚型aiv与chpv都对家禽养殖业造成了严重的危害。鸡细小bingdu在正常鸡胚和细胞培养中难以大量增殖，因此应用bingdu分离及电镜观察等方法对该病进行诊断的难度很大。传统的禽流感bingdu检测方法是将bingdu分离培养后再进行血清学方法鉴定，培养周期长，且要用到较多标准阳性血清，但是禽流感bingdu不同亚型血清相互之间又存在不同程度的交叉免疫保护反应，其结果的准确性具有局限性，所以目前禽流感bingdu较多的采用分子生物学方法进行检测。分子生物学方法特别是rt-pcr检测技术具有快速、简便和准确等优点，在禽流感的诊断及大规模监测过程中应用广fan，洪山区好的细小病菌联系方式，洪山区好的细小病菌联系方式，洪山区好的细小病菌联系方式。由于aiv染上动物后具有相似的临床症状，混合染上的现象也普遍存在，所以在日常诊断中难以及时准确的对其进行鉴别确诊。近年来，随着分子生物学技术的发展。

    下游引物)：5’-cattactgagaacaatccgtaggc-3’(序列表中sedid**6)；cav2-p(taqman荧光探针)：5’-quasar705-gtcttctgccaacatgctttatccc–bhq3-3’(序列表中sedid**7)。cav2-p的报告荧光基团为quasar705，荧光淬灭基团为bhq3。cdv-p(taqman荧光探针)：5’-cy5-cctttggaggaggacagttgccttcttat-bhq2-3’(序列表中sedid**8)。cdv-p的报告荧光基团为cy5，荧光淬灭基团为bhq2。cpv-p(taqman荧光探针)：5’-fam-atggcaaacaaatagagcattgggcttacc-bhq2-3’(序列表中sedid**9)。cpv-p的报告荧光基团为fam，荧光淬灭基团为bhq2。cpiv-p(taqman荧光探针)：5’-hex-actgcaagatcagagtgaggaaggtacaatcc-bhq2-3’(序列表中sedidno：20)。cpiv-p的报告荧光基团为hex，荧光淬灭基团为bhq2。为防止pcr扩增时被延伸，所述探针的3’端已经磷酸化处理。实施例2、cav-ii、cpv、cdv和cpiv的四重实时荧光定量pcr检测、提取基因组dna或rna使用axypreptmbodyfluidviraldna/rnaminiprepkit(axygen公司)对cav-ii、cpv、cdv和cpiv的细胞培养物(用于获得标准品和阳性对照)以及待测样品提取基因组dna或rna，具体方法包括以下步骤：(1)axygen试剂盒准备：按试剂盒说明书。

    上述待测样品包括用于疫苗生产的原料、疫苗半成品及成品。基于以上技术方案提供的用于鉴别检测犬腺bingduii型(cav-ii)、犬细小bingdu(cpv)、犬瘟热bingdu(cdv)和犬副流感bingdu(cpiv)的四重实时荧光定量pcr检测试剂盒及其**引物和taqman探针能同时对cav-ii、cpv、cdv和cpiv实施快速鉴别和定量检测，可用于疫苗生产过程中原料毒株的筛选、质量监控和合理化配苗(如评估配制疫苗抗原的准确含量，为疫苗抗原含量提供数据基础)，确保疫苗接种的安全性和合理性，对cav-ii、cpv、cdv和cpiv疫苗的生产具有指导作用。还可以对犬只源细胞质量进行监控，并为后续处置提供客观数据，以保证犬只源细胞及其制品的安全性。还可以为临床病原主要流行情况的调查提供有力依据。本发明的试剂盒和检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好，可以同时实现对cav-ii、cpv、cdv和cpiv的定性检测和准确定量，将在样本中cav-ii、cpv、cdv和cpiv的准确检测及在疫苗生产、犬只制品生产(非诊断目的的应用)中发挥重要作用，应用前景广阔。附图说明图1为本发明用实时荧光定量pcr技术对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行定性、定量、鉴别检测的技术路线。

免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。