按照每毫升**初的 Trizol 加入 1 ml 75%乙醇(DEPC 水配制)的比例,Vortex混匀或颠倒混匀,让沉淀悬浮起来以充分洗涤沉淀中的盐分。
9、4°C,12000rpm 离心 5 分钟,弃上清。剩余的少量液体再用离心机瞬甩一下, 彻底去掉上清液。注意不要吸到沉淀,否则会造成 RNA 损失。
10,天津四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元、室温放置空气干燥 5-10 分钟,待 RNA 沉淀略干后,加入适量(约 20-100µl)的 RNase-free 水溶解 RNA 沉淀,-80°C 冻存。【注】切勿让 RNA 彻底干燥,天津四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元,天津四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元,否则将导致 RNA 溶解度降低。
对基层医疗地区的患者来说,进行基因检测十分不易。天津四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元
RNA提取注意事项(1):
迅速灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解。 以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活: 1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀浆。 2)用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是:组织块必须保证足够小,在浸入液氮的瞬间就能冻结,以确保瞬间令RNA酶失活。3)立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、的收集试剂,能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄(<0.5 cm),这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。 天津四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元凡知医学基于自主创新的试剂冻干技术、等温扩增技术、微流控芯片技术等开发了一体化基因快速检测仪。
RNA 常用提取方法(1)
1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法:
原理:使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性,经过起始密度为1.78g/m l 的氯化铯介质,进行密度梯度超速离心,RNA沉淀于管底,而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法,不但能得到高质量的RNA ,而且能同时分离出细胞染色体DNA。
2、盐酸胍-有机溶剂法:
原理:本法有MacDonald1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的,适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。它利用盐酸胍制抑RNA酶,匀浆裂解细胞,有机溶剂抽提去除蛋白质,通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA。
3、氯化锂-尿素法:
原理:本法首先由Auffray报道,利用高浓度尿素变性蛋白质同时制抑RNA酶,3 mol/L LiCl选择性沉淀RNA。
RNA试剂盒 用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但较好的试剂盒价格比较贵,在实验室可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用
(以离心柱型为例):一般包括:成分数量储藏温度有效期裂解液100ml2-8℃一年漂洗液30mlRT一年洗柱液100mlRT一年RNasefreeddH2O30mlRT一年RNasefree吸附柱100个RT一年RNasefree收集管(2ml)100个RT一年此外,还配有一份试剂盒使用说明书,根据不同的生产商,可能还配有不同的试剂,如:DNA酶、溶菌酶等。 在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。
RNAprep pure Micro Kit 采用***、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从多种不同类型的微量样品中快速提取总RNA。本试剂盒特别加入了Carrier RNA,可以从体系中轻松捕获微量核酸,具有方便快捷、产量高、重复性好的特点,30-40 分钟内即可完成反应。
与其它提取RNA 的普通方法相比,微量样品RNA 提取试剂盒将所有<200bp 的RNA(5.8S rRNA, 5S rRNA 和tRNAs 等)选择性的筛除,而所有>200bp 的RNA 则被富集、分离和纯化。提取的总RNA 纯度极高,没有DNA 和蛋白质污染。 其价格比进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。北京9分钟完成RNA提取试剂盒50T/690元
取新鲜或-70℃冻存100mg**在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。天津四步完成RNA提取试剂盒500T/5865元
RNA提取注意事项(3)
破壁方法
细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说,是一个很关键的步骤,它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中,通过简单的涡旋震荡来匀浆;而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真核细菌则常常需要更加剧烈的方法,通常用液氮研磨。比如说细菌(特别是革兰氏阳性菌)的细胞壁,就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的比较大回收。酵母和革兰氏阳性菌通常还需要液氮研磨过程中加入玻璃微珠帮助破壁,酵母提取也可以加入诸如Lyticase等破壁酶帮助破壁,再用TRIpure或RNApure进行提取。
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