在肌肉、皮下、静脉或腹腔内注射；·抗体效价的检测：加强免疫一周后，耳缘静脉**–抗体效价测定可用环状沉淀试验、琼脂双向扩散法等方法。前者抗体效价在1:4000以上，后者在1:16以上，即可**，取血清进一步提纯。举例2：微量抗原淋巴结内注射免疫家兔·一般选择～–先在其两脚垫注射完全福氏佐剂(卡介苗每兔合5mg)；–10天后，见胭窝淋巴结肿大，然后将抗原注射至肿大的淋巴结内，***次注射抗原用完全福氏佐剂混合乳化；–以后每隔20天用不完全福氏佐剂乳化抗原，以同样方法加强2次，各次注射的抗原均为25～50g；–末次注射两周后兔耳放血测价(可达1:128)，天津六色免疫组化检测服务。举例3：豚鼠和大鼠的免疫·初次免疫–用10～100gAg加入FCA，在背部皮内注射4～6点，每点，也可肌肉内或皮下注射；·加强免疫–每隔7～8天，将10～50gAg于PBS或FIA中。在肌肉、皮下或静脉注射；·抗体效价的检测(4)免疫剂量·抗原性强的抗原量应小，过大反会引起免疫***；·免疫周期长的动物可少量多次注射，天津六色免疫组化检测服务，天津六色免疫组化检测服务，短的可大量少次。(4)免疫剂量(续)·各种动物***免疫抗原剂量和加强免疫的剂量(5)抗体效价的检测多采免疫双向扩散法【基本原理】·指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。天津六色免疫组化检测服务

    在碱性条件下，易与蛋白质的赖氨酸-氨基反应而标记在蛋白分子上。(4)碘化丙啶(PI)·是常用的DNA荧光标记探针，可作为FITC的胞核对比染色。·PI可嵌入到双链DNA和RNA碱基对中并与之结合，但对碱基无特异性选择。·比较大吸收光谱是493nm，比较大发射光谱是630nm，呈红色荧光。2、荧光抗体的保存·一要防止抗体失活，二要保持荧光素不脱落和不受激发猝灭。–一般认为0～4C可保存1～2年，-20C可保存3～4年。–要小量分装，防止反复冻融。–保存前需加防腐剂(浓度为1:5000～10000的硫柳汞或1:1000～5000叠氮化钠)。3、免疫荧光的染色方法·免疫荧光染色法常用的有–直接法–间接法原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应(用来检测未知抗原)。直接免疫荧光法的操作步骤·标本的处理：–细胞涂片、细胞爬片浸入冷**或4%的多聚甲醛固定10min，然后用PBST(含pH)漂洗5min×3/次；–石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后，进行抗原修复，然后用PBST漂洗5min×3/次；·2%BSA或10%BSA37C湿盒内封闭30min·抗体染色：–在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:8或1:16稀释)，放在湿盒中，37C孵育30min；直接免疫荧光法的操作步骤(续)·PBS。上海多标记免疫组化分析服务

    在放入氨水中返兰即可。13）封片为了长期保存，我们一般用中性树胶等封片，避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。2、免疫荧光方法中的重要环节1）冰冻切片制备建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2）组织切片固定切好片风干后立即用冰**等固定液进行固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3）血清封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4）一抗孵育条件在免疫组化反应中**重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4℃、室温、37℃，其中4℃效果比较好；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37℃1-2h，而4℃过夜和从冰箱拿出后37℃复温45min。具体条件还要摸索。5）二抗孵育条件二抗一般室温或37℃30min-1h。

    其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中优先的组织标本制作方法。免疫组化抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。免疫组化常用染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法**常用。免疫组化操作步骤编辑一免疫组化（SP法）操作步骤1．切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行2.缓冲液洗3min/2次。3.为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分钟。4.缓冲液洗5min/2次。5.滴加UltraVBlock。

  近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难**得到了明确诊断。在常规**病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在**诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化**的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：⑴恶性**的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性**的原发部位；⑶对某类**进行进一步的病理分型；⑷软组织**的zhiliao一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织**的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床zhiliao方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供zhiliao方案的选择。天津六色免疫组化检测服务

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    在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。（注：孵育不要超过10分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有5－10%正常羊血清，这一步可以省略。）6.缓冲液洗5min/2次。7.滴加一抗工作液37℃孵育1－2小时。（具体孵育时间和温度由试验者**终决定）8.缓冲液洗5min/2次。9．滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。10．缓冲液洗5min/2次。11．滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。（注：HRPPolymer对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。）12．缓冲液洗5min/2次。13．向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate)中滴加1-2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。（具体时间由染色深浅决定。）14．自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。免疫组化操作步骤⑴、石蜡切片脱蜡至水。⑵、3%H2O2室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。⑶、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟x2（如需抗原修复，可在此步后进行）。⑷、5-10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟，倾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。⑸、PBS冲洗，5分钟x3次。天津六色免疫组化检测服务

上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22，是一家服务型的公司。公司业务涵盖[ "科研技术服务", "应用技术服务", "科研成果转化", "科学产品销售" ]等，价格合理，品质有保证。公司秉持诚信为本的经营理念，在化工深耕多年，以技术为先导，以自主产品为**，发挥人才优势，打造化工质量品牌。公司凭借深厚技术支持，年营业额度达到2000-3000万元，并与多家行业**公司建立了紧密的合作关系。

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