用于病原体检测:常规PCR不能定量,在操作中易污染导致出现假阳性结果,应用实时荧光定量PCR技术可以解决这些问题。此项技术已应用于检测丙肝***,上海食品安全荧光定量PCR技术服务、宫颈*及其*前病变有关的人类**瘤***,上海食品安全荧光定量PCR技术服务、抗结核******后定量检测病人痰样本病原体DNA含量,为疾病的诊断和***提供依据。用此项技术还可以一次性检测大量大肠杆菌样本,上海食品安全荧光定量PCR技术服务,简便准确,是食品检面的一个突破
用于***选择和疗效判断:化疗过程中主要问题是病人对化疗***的耐药,检测**耐药基因的表达水平是选择化疗***的依据。检测微小残留病变的变化情况对于调整***策略和对病人进行个体化***非常重要
荧光定量PCR 技术,是通过在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,对起始模板进行定量分析的方法。实验采用两种定量方式,即***定量和相对定量。荧光定量PCR 可用于mRNA 表达量水平检测、MicroRNA 表达量水平检测和基因拷贝数检测。实验的方法可分为SYBR Green I 法和TaqMan 探针法。
客户提供提供样本
细胞:细胞数>10^6;
组织:总量>100 mg;
DNA 或RNA 样品:总量>2 μg。
可选样本引物:可由客户提供,没有引物的情况下,可由生工生物设计合成
提供信息
靶基因信息:包括基因序列或GenBank Accession Number 等;背景资料:包括生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。**终交付交付报告
实验报告:包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。
比较Ct值的相对定量法:此方法是将待测靶基因片段和内参照基因片段同时扩增,可以在两个反应管中或者一个反应管中进行扩增反应,并且就两者的ct值之差进行测量。在采用此方法过程中需要用数学公式进行相对量的计算,首先要假设每个循环产物增加一倍时PCR反应**期得到Ct值对起始模板的量一个循环的估算和起始模板数两倍相当。这种方法的前提是靶基因和内源控制物的扩增效率基本一致,所以在应用过程中效率的偏移会对实际拷贝数估计产生一定影响,因此,为了保证目的基因和内参基因的扩增效率相等应当加强对反应体系的优化,这也是该方法应用的难点之一
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