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尿酸是人体内嘌呤核苷酸的分解代谢产物,嘌呤核苷酸80%由细胞代谢产生,20%源于饮食,可见血尿酸水平受饮食影响亦较大。每天代谢产生的尿酸主要从肾脏排出体外。尿酸在血液中的比较高溶解度为420μmol/L,超过此值,尿酸盐即易析出结晶而沉积于zuzhi并引起炎性bing变,例如沉积于关节,即引起大家熟知的痛风性关节炎。那尿酸高是怎么回事?是什么导致尿酸过高的呢?首先,应该先了解尿酸来自何处。人体尿酸主要来源于两个方面:(1)人体细胞内蛋白质分解代谢产生的核酸和其它嘌呤类化合物,经一些酶的作用而生成内源性尿酸。(2)食物中所含的嘌呤类化合物、核酸及**白成分,经过消化与吸收后,经一些酶的作用生成外源性尿酸。痛风就是由于各种因素导致这些酶的:促进尿酸合成的酶,主要为5-磷酸核酸-1-焦磷酸合成酶、腺嘌呤磷酸核苷酸转移酶、磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶和黄嘌呤氧化酶;抑zhi尿酸合成的酶等活性异常,例如促进尿酸合成酶的活性增强,抑zhi尿酸合成酶的活性减弱等,从而导致尿酸生成过多。而饮食是尿酸高患者外源性嘌呤和尿酸的主要来源,尿酸主要是从饮食中核苷酸分解而来。约占体内总尿酸的20%。对高尿酸血症而言,内源性代谢紊乱比外源性因素更重要。
寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端一段互补的寡核苷核序列,此序列的5’-端多加一个A,与目的基因片段退火,再用Klenow酶延伸,使bio–dUTP掺入探针的3’末端。2.5’磷酸末端标记法带5’-磷酸的寡核苷酸探针,在咪唑缓冲液中用水溶性碳二亚胺(EDC)处理,可生成活性的磷酸咪唑中间体,与过量的乙二胺作用,就可以引入一个带氨基的接臂。用活化生物素标记就可以得到5’-磷酸标记的寡核苷酸探针。3.酶标探针法用双功能联接剂如辛二酸双羟基琥珀亚胺酯联接寡核苷酸和碱磷酶,可以生成1:1的酶标寡核苷酸探针。此法省略了生物素-亲合素中间步骤,可减少非特异性反应。4.生物素酰肼胞嘧啶修饰法在亚liusuan盐催化下,生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基而得生物素化寡核苷酸探针。5.寡核苷酸的酶促加尾标记法在末端转移酶的作用下,用非放射性物质修饰的核苷酸(生物素dATP;生物素-dUTP;地高辛-dUTP)可加到DNA的3’末端,每个探针DNA可加上10~20个修饰碱基。(1)取,插入冰浴中,加入寡核苷酸(3pmol)×μl,5×加尾缓冲液20μl,dUTP4μl(终浓度200μmol/L),修饰的dNTP(生物素-dUTP。
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