DNA的固相合成。即DNA3'端固定于基质上,然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于应用DNA聚合酶的DNA合成。合成过程第yi个碱基的3‘末端固定在树脂上,下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用苯甲酸保护,然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化。’-OH和下个碱基的3‘-OH形成亚磷酸三酯,2.然后用碘氧化成磷酸三酯3.加入二氯乙酸除去第二个碱基5’-OH上的保护剂DMT循环进行加入下一个碱基合成完毕后1。用苯硫酚除去5’-OH上的保护剂DMT2。用浓氢氧化铵将片段与固体树脂断开,洗脱3,浙江基因合成仪,浙江基因合成仪。用浓氢氧化铵在加热的条件下除去碱基上的保护剂4,浙江基因合成仪。除去氢氧化铵,真空抽干5。液相色谱或者PAGE,回收片段**长的。
合成柱起始结合在载体(一般为CPG)上的核苷酸是装在一次性的柱子中,除柱体外,还有2个固定过滤板和2个接头,所有的部件都由惰性材料制成。固定过滤板是多孑L性聚苯乙烯固定在两端盖子中。入口和出口都是母路厄氏(1uer)接头,与仪器的公路厄氏接头配对。柱子是对称的(没有顶端和底部、前后之分),可以以任何方式与公路厄氏接头相连接。每一个柱子都用颜色编号,表示不同的起始核苷酸,以及有一个唯yi的连续顺序号码。正常的流路是从底部进入,通过向上输送液体,使CPG颗粒上升并保持悬浮状态。溶剂和试剂的流速已经设置好,能使颗粒适当地混合。
特点与性能编辑一、按照不同用途,DNA合成仪可分为实验室型,工业型和大规模合成三种主要类型。1,实验室型:主要指合成通量较小,且单柱合成产物为10-1000nmol的DNA合成仪,一般为合成柱数低于48柱(含)的DNA合成仪,主要适用于化学生物学实验室,或某些刚起步的商业机构。该类型DNA合成仪品牌较多,包括已停产的ABI391,394,3400,3900,BECKMANoligo-1000,及仍然量产的polygen10柱,12柱,mermade4,6,8,12,48柱;BIOSSETASM-800,AZCOOLIGO-8等。2,工业型工业型合成仪,主要指合成通量大,且单柱合成产物为10-1000nmol的DNA合成仪。工业型合成仪常见的合成柱数为96柱、192柱,384柱或更多合成柱数的合成仪较为鲜见。主要适用于大型实验室,公用实验平台及商业合成机构。
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