人们以多肽的液相和固相合成方法为基础又发展了氨基酸的羧内酸酐(NCA)法、组合化学法等。多肽的生物合成方法主要包括发酵法、酶解法,随着生物工程技术的发展,以DNA重组技术为主导的基因工程法也被应用于多肽的合成。其他多肽合成方法1、氨基酸的羧内酸酐法(NCA)氨基酸的羧内酸酐的氨基保护基也可活化羧基。NCA的原理:在碱性条件下,氨基酸阴离子与NCA形成一个更稳定的氨基甲酸酯类离子,在酸化时该离子失去二氧化碳,生成二肽。生成的二肽又与其他的NCA结合,反复进行。NCA适用于短链肽片段的多肽合成,其周期短、操作简单,广东销售DNA合成仪、成本低、得到产物分子量高,广东销售DNA合成仪,在目前多肽合成中所占比例较大,技术也较为通用。2、组合化学法20世纪80年代,以固相多肽合成为基础提出了组合化学法,即氨基酸的构建单元通过组合的方式进行连接,合成出含有大量化合物的化学库,并从中筛选出具有某种理化性质或药理活性化合物的一套多肽合成策略和筛选方案。组合化学法的多肽合成策略主要包括:混合-均分法、迭代法、光控定位组合库法、茶叶袋法等,广东销售DNA合成仪。组合化学法的zui大优点在于可同时合成多种化合物,并且能zui大限度地筛选各种新化合物及其异构体。
6100全自动DNA/RNA提取及自动加样仪;2万多种人基因和15000种小鼠大鼠基因表达定量分析试剂盒。蛋白质组研究:4700型TOF-TOF蛋白质组发现系统,QStarXL**辨液相串联质谱仪;QTrap系列串联四极杆**辨线性离子阱质谱仪,Voyager系列飞行时间质谱仪;491蛋白质序列测定仪;多肽合成仪;公司**的ICAT和iTraq技术可全景式进行两种样品内各种蛋白的定量分析和差异蛋白的结构鉴定。FMAT8200激光共聚焦细胞检测系统可用于抗体及药品筛查。新药开发食品安全:液相串联四极杆质谱API4000/3000/2000LC/MS/MS及新型QTrap系列串联四极杆**辨线性离子阱质谱仪可用于药代动力学研究和食品饮料中农药的残留分析及环境保护研究;并在临床用药安全和新生儿遗传病筛查发挥重大作用;生物信息学与知识产品:CeleraDiscoverySystem人类基因蛋白质一体化科学信息数据库,全球***的实验室信息管理系统LIMS系统。AppliedBiosystems,CeleraGenomics和CeleraDiagnostics三家公司共同组成了美国Applera公司。AppliedBiosystems公司为生命科学和实验室仪器领域全球比较大的生产厂家,2004年公司全球销售额达17亿美圆,公司为美国纽约证交所上市公司。
加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中7.加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃处理1h8.用酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)9.取上清,1/10V3MNaAc,℃沉淀30min以上10.沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用DNA提取缓冲液:100mMTris-HCl(),20mMEDTA(),NaCl,2%CTAB(W/V),4%PVP40(W/V)和2%巯基乙醇(V/V),PVP和巯基乙醇使用前加入5MKAc方法一和二,是大同小异.主要是DNA提取液配方不一样!成本也不一样!三、***菌丝的总RNA的提取1.实验试剂(1)RNA提取缓冲液(CTAB):2%CTAB(W/V),2%聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100mMTris-HCl(),25mMEDTA,亚精胺Spermidine,NaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入).由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC处理的水配制即可(2)SSTE:1MNaCl,SDS(W/V),10mMTris-HClEDTA(3)10MLiCl直接用蒸馏水配10MLiCl,加1‰的DEPC过夜后,高温灭菌(4)3MNaAc(5)氯仿:异戊醇(24:1)(6)酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)(7)DEPC处理水用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜,高温灭菌(8)无水乙醇。
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