RNA 常用提取方法（1）

1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法:

     原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性，经过起始密度为1.78g/m l 的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法，不但能得到高质量的RNA ，而且能同时分离出细胞染色体DNA。

2、盐酸胍-有机溶剂法：

     原理：本法有MacDonald1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的，适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA，江苏新手RNA提取试剂盒信赖推荐。它利用盐酸胍制抑RNA酶，匀浆裂解细胞，有机溶剂抽提去除蛋白质,通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA。

3，江苏新手RNA提取试剂盒信赖推荐，江苏新手RNA提取试剂盒信赖推荐、氯化锂-尿素法：

     原理：本法首先由Auffray报道,利用高浓度尿素变性蛋白质同时制抑RNA酶，3 mol/L LiCl选择性沉淀RNA。 

细胞中的RNA主要有三类：rRNA约占80％－85％，tRNA和核内小分子RNA约占10%-15%，mRNA约占1%-5%，由于rRNA占绝大多数，因此我们用琼脂糖凝胶电泳可以看到的即是rRNA，它也有三种类型：28S，18S，5S三条带，在RNA的提取时，一定要注意RNase的污染，因RNA极易被RNase的降解，操作时应尽量少说话，并在洁净的环境中操作，主要防止手、唾液和空气中Rnase的污染；另一方面使用的所有玻璃仪器、移液器、吸头和离心管都用0.5%DEPC溶液处理过夜,然后高压无菌15分钟.但对于无菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNase,，可以不经处理直接用于提取RNA，实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有Rnase污染，使用前必须180度干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品），另外，由于材料不同，机体内含有的糖、酚类物质不一样，因此材料不同用的方法也应该不一样。

缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，若一次不能将全部溶液和混合物加入纯化柱，请分两次转入纯化柱中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃掉收集管中的废液。

向纯化柱中加入500 μl 溶液 RPI(使用前请先检查是否已加入乙醇)，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液。

 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RW(使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液。

 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW，室温静置2 分钟，4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s，去除残余液体。

将纯化柱入2ml 收集管中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min，去除残余液体。

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