实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）技术是在PCR技术的基础上发展起来的核酸定量技术，它是通过在PCR反应体系中加入荧光基团，然后利用荧光信号的积累强弱实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知的DNA模板进行定量，实现了PCR从定性到定量的飞跃，为快速准确地分析样本中的各类待检物质提供了崭新的技术工具，现在已被广泛应用于实验室及临床**标志物的检测。Real-Time PCR与传统的PCR技术相比其使用了荧光探针标记特定核酸从而提高了准确性；灵敏度提高故使用较少的样本量，从而减少了样本消耗殆尽的风险，在一小时左右即可出结果，简化了传统PCR方法；全封闭管分析，天津水体基因组荧光定量PCR实验技术服务，天津水体基因组荧光定量PCR实验技术服务、利用电脑分析软件对PCR扩增产物的实时动态的检测和自动定量，定量动态范围高达五个数量级，天津水体基因组荧光定量PCR实验技术服务，且结果重现性较好，这也提高了检测的灵敏度和精密度。

实时荧光定量常用Taqman探针法和SYBR Green I法两类。

1.TaqMan探针法

TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理为有一对 PCR 引物和一条探针存在于PCR 反应体系中，有荧光淬灭基团存在于3′

端标记，有报告基团存在于探针的5′ 端标记，探针*和模板特异结合，两条引物之间是其结合点。因此信号仪器搜集不到，伴随反应的进展，探针在外切核酸酶的活性的作用下被切断，从而造成淬灭基团不能吸收基团的荧光能量，从而使荧光信号产生，所以模板 DNA 的拷贝数取决于信号的强度。

2.SYBR Green I法

SYBR Green I为一种具有绿色激发波长的染料，其发射波长比较大约为 520 nm，比较大吸收波长约为 497 nm，能够结合所有的双螺旋小沟区域。由于处于游离状态，SYBR Green I发出的荧光较弱，然而其结合双链 DNA之后，就会使得荧光**增强，荧光信号的增加完全同步PCR 产物的增加。

SNP基因分型技术原理是PCR扩增含有SNP的基因组片段，主要特点是准确性高、灵活性强、通量大，主要方法是TaqMan探针法。TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间的PRET，发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。

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