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江苏多色荧光免疫组化 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

信息介绍 / Information introduction

    抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,江苏多色荧光免疫组化,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,江苏多色荧光免疫组化,定位或定量的研究,江苏多色荧光免疫组化。免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。这些常用免疫组织化学方法的原理如下:免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光。

    如淋巴细胞表面抗原尤其适合。·组织冻结过程中,细胞内、外的水分会形成冰晶,冻结的速度愈慢,冰晶颗粒愈大,可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。1、冰冻组织块的常用方法·液氮中冰冻:组织投入液氮中(一196C)中10~20sec;·干冰中加入**(或异戊烷),液体立即气化起泡,温度降至一70C,将组织投入,若在干冰**中置一盛有异戊烷的容器,组织投入该容器内结冻则更好;–上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内,以保护组织。–制成冻块后若需保存,应以铝箔或塑料薄膜封包,贮存于-70C冰箱。2、切片·供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整,并有连续性。·载玻片也应清洁无油污,但一般无需涂抹粘附剂;·切片时,使用恒温冷冻切片机,在箱内温度-25C。切片厚度一般为4~8m。3、切片后处理·切好的冰冻切片,室温下自然晾干1~2h后,入4C**固定10min,待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。·冰冻切片由于切片技术要求较高,不易得到连续性很好的切片,其形态结构亦不如石蜡片,且冻块和切片不便于长期贮存,因此冰冻切片的应用受限。

    免疫细胞化学技术组织印片·将洁净载玻片轻压于已暴露病灶的新鲜组织切面,细胞即粘附于玻片,晾干后浸入冷**或醋酸-乙醇固定10min,自然干燥后染片或-20℃保存。免疫细胞化学技术细胞培养片(细胞爬片)·贴壁细胞培养时,置盖片于培养瓶中,使细胞在盖片上生长,达适当密度后取出固定(**-20C固定10~20min),再进行免疫染色。–盖片的处理方法同载玻片的处理,但泡酸时间2h即可。–为了防止细胞脱片,可用多聚赖氨酸处理。免疫细胞化学技术细胞涂片·大多数细胞涂片由细胞悬液制成,包括:–血液、尿液、脑脊液;–体腔积液;–组织穿刺吸取,如骨髓、淋巴结或其他实质性组织–悬浮培养的细胞或贴壁细胞经消化后形成的悬液。免疫细胞化学技术细胞涂片(续)·细胞涂片的方法:–手涂法·将细胞浓度调节到106/ml左右,可直接涂于载玻片上,但要均匀、不重叠。·图片范围应小于1cm直径,以节约试剂。–涂片机涂片法·将细胞样品制成2×105~6/ml细胞悬液,吸取50~100l(1~2×104~5cells)加入涂片机内,1000rpm离心2min后细胞就均匀分布于玻片上。免疫细胞化学技术常用染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法、免疫酶标法、亲和组织化学法。

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