***DNA和RNA提取方法一、***DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:Tris-HCl(pH),NaCl,EDTA,1％SDS(2)3MNaAc(3)TE:10mmol/LTris-HClmmol/LEDTA(4)酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)(5)氯仿:异戊醇(24:1)(6)异丙醇(7)无水乙醇(8)75%乙醇(9)RNaseA2，广东DNA合成仪服务商.实验步骤(1)取***菌丝,在液氮中迅速研磨成粉(2)加入4mL提取液,快速振荡混匀(3)加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，广东DNA合成仪服务商,涡旋3～5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本)(4)1000rpm,4℃,5min(5)上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次(10,000rpm,4℃离心5min)(6)取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或,混匀,静置约30min(7)用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中(8)加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃处理1h(9)用酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)(10)取上清,1/10V3MNaAc,℃沉淀30min以上(11)沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中，广东DNA合成仪服务商,-20℃保存备用二、***DNA的提取(方法二)1.***菌丝2.加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次3.加入1mL5MKAc,冰浴20min4.氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)5.取上清。
加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中7.加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃处理1h8.用酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)9.取上清,1/10V3MNaAc,℃沉淀30min以上10.沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用DNA提取缓冲液:100mMTris-HCl(),20mMEDTA(),NaCl,2%CTAB(W/V),4%PVP40(W/V)和2%巯基乙醇(V/V),PVP和巯基乙醇使用前加入5MKAc方法一和二,是大同小异.主要是DNA提取液配方不一样！成本也不一样！三、***菌丝的总RNA的提取1.实验试剂(1)RNA提取缓冲液(CTAB):2%CTAB(W/V),2%聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100mMTris-HCl(),25mMEDTA,亚精胺Spermidine,NaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入).由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC处理的水配制即可(2)SSTE:1MNaCl,SDS(W/V),10mMTris-HClEDTA(3)10MLiCl直接用蒸馏水配10MLiCl,加1‰的DEPC过夜后,高温灭菌(4)3MNaAc(5)氯仿:异戊醇(24:1)(6)酚():氯仿:异戊醇(25:24:1)(7)DEPC处理水用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜,高温灭菌(8)无水乙醇。
测试飞行高度为20米。Starhopper使用SpaceX研发的下一代发动机Raptor提供动力，将用于星际飞船和超级重型火箭。2020年1月19日，SpaceX引bao一架猎鹰9号火箭，进行龙飞船载人舱和火箭的分离测试。测试成功表明，在发生故障的情况下，可以将载人舱与火箭助推器分离，保护宇航员。这是龙飞船载人进入太空前的一次重要测试，完成该测试后，下一个任务将是运送宇航员前往国际空间站。首ci载人任务即将进行2020年1月末，SpaceX对载人龙飞船的发射中止系统进行成功测试，并与NASA进行了后续任务和计划的讨论。在与NASA的合作中，SpaceX和波音的竞争已经接近尾声，SpaceX有望成为美国首jia在商业载人项目中把人类送上太空的航空公司。据悉，SpaceX的载人发射预计会在今年5月初进行。：火星及更遥远处2012年11月底，埃隆·马斯克提出火星殖民计划，希望把人类带入火星，甚至能够进军更遥远的星空。尽管该计划看似很遥远，但从过去十年中公司取得的成就来看，SpaceX崛起的速度本身就非常让人难以置信。火箭回收、龙飞船、星舰测试，SpaceX的每一步都离火星殖民计划越来越近。虽然目前还没有进军火星的确切日期，要实现该目标也还有许多障碍需要克服。
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