确定在凝胶/膜和滤纸之间没有气泡存在，否则会导致转膜不完全。6、保证膜和滤纸的大小和凝胶完全一样，过大和过小都会影响转膜效率。7、鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力，从而产生较高的背景，故如果选择鸡来源的抗体使用硝酸纤维素膜（NC膜）关于磷酸化蛋白检测的注意事项：1、保持待测蛋白处于磷酸化状态！在标本提取液中加入足够的磷酸酶***剂（NaF，可以防止去磷酸化），并将标本时刻保持在冰浴中！2、使用5%的BSA作为封闭试剂！不能使用脱脂奶粉！（因为脱脂奶粉中含有酪蛋白，会出现很高的背景）。抗体保存注意事项：1、收到抗体后按要求离心后再打开管盖进行分装盒保存！2、对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃分装的量以一次实验用完为好，广东操作性能好192引物合成仪厂家直供，**少不能少于10μl每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来！***避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。3，广东操作性能好192引物合成仪厂家直供、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。4，广东操作性能好192引物合成仪厂家直供、长期保存，加入叠氮钠，防止细菌污染。色，自来水冲洗切片终止显色。8、复染细胞核：Harris苏木素复染3min左右。

    异戊二烯化的蛋白质包括酪氨酸磷酸酶、小GTP酶、协同伴侣分子、核纤层和着丝粒结合蛋白。异戊二烯化的多肽可以利用树脂上的异戊二烯化方法或者引入半胱氨酸衍生物制备[9]。7、聚乙二醇（PEG）修饰PEG修饰可用于改善蛋白水解稳定性、生物分布和肽的溶解度[10]。在多肽上引入PEG链可以改善它们的药理性质，也可以***多肽被蛋白水解酶水解。PEG多肽比普通多肽更容易通过肾小球***截面，**减少肾***率。由于PEG多肽在体内的有效半衰期延长，因此使用更低剂量、更低频度的多肽***便可以维持正常***水平。但PEG修饰也存在负效应。大量PEG在阻止酶降解多肽的同时也会减少多肽与目标受体的结合。但PEG多肽的低亲和力通常被其更长的药动学半衰期抵消，通过在体内存在更久，PEG多肽有更大可能性被目标**吸收。因此，PEG聚合物的规格应该针对比较好结果进行比较好化设计。另一方面，由于肾***率降低，PEG多肽会在肝脏累积造成大分子综合征。因此，当多肽用于***测试时需要更加谨慎地设计PEG修饰。PEG修饰剂常见的修饰基团大致可总结如下：氨基（-Amine）-NH2，氨甲基-CH2-NH2，羟基-OH，羧基-COOH，巯基（-Thiol），马来酰亚胺-MAL，琥珀酰亚胺碳酸酯-SC，琥珀酰亚胺乙酸酯-SCM。

    长链引物合成，您要有引物中部分引物可能有突变的思想准备。17.如果测序发现突变，该如何处理？答：遇到这种情况，首先和核酸合成厂家取得，生产人员会检查生产的原始记录，主要是核对合成序列是否和定单一致，他们在电脑中一般会保留所有原始数据。在确认引物合成序列没有输错的情况下，建议重新挑取克隆测序，可能会找到正确克隆的。根据经验，40个碱基以下的引物，测1-2个克隆就可以了；40个以上的特别是用于全片段拼接合成的，就需要多测一些了。一般情况下，每个克隆突变的位点都不一样，提示正确的总是有的，就是如何找到它。也可以要求公司将引物**重合一次，不过重合的引物和*次的引物一样，都可能含突变，不会因为重合的引物就减少您的遇到问题的几率。基因拼接过程中，如果发现一段区域突变点不多，就多测几个，否则就重合一下引物。18.引物是经过PAGE纯化的，为什么还有碱基缺失或插入？答：理论上分析型PAGE变性电泳，可以区分引物之间一个碱基的差别。但是制备PAGE电泳，上样量都是非常大，电泳时的条带非常宽，带与带之间有重叠，分辨率已下降，电泳后割带回收目的引物时，很难说不割到差别*几个碱基的引物。国内有一个不好的现象，PAGE纯化的引物。

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