人们以多肽的液相和固相合成方法为基础又发展了氨基酸的羧内酸酐(NCA)法、组合化学法等。多肽的生物合成方法主要包括发酵法、酶解法，随着生物工程技术的发展，以DNA重组技术为主导的基因工程法也被应用于多肽的合成。其他多肽合成方法1、氨基酸的羧内酸酐法(NCA)氨基酸的羧内酸酐的氨基保护基也可活化羧基。NCA的原理:在碱性条件下，氨基酸阴离子与NCA形成一个更稳定的氨基甲酸酯类离子，在酸化时该离子失去二氧化碳，生成二肽。生成的二肽又与其他的NCA结合，反复进行。NCA适用于短链肽片段的多肽合成，其周期短、操作简单、成本低、得到产物分子量高，上海口碑好192引物合成仪厂家，上海口碑好192引物合成仪厂家，上海口碑好192引物合成仪厂家，在目前多肽合成中所占比例较大，技术也较为通用。2、组合化学法20世纪80年代，以固相多肽合成为基础提出了组合化学法，即氨基酸的构建单元通过组合的方式进行连接，合成出含有大量化合物的化学库，并从中筛选出具有某种理化性质或药理活性化合物的一套多肽合成策略和筛选方案。组合化学法的多肽合成策略主要包括:混合-均分法、迭代法、光控定位组合库法、茶叶袋法等。组合化学法的比较大优点在于可同时合成多种化合物，并且能比较大限度地筛选各种新化合物及其异构体。

    通常在多肽和生物素之间使用6-氨基己酸作为纽带，纽带能够灵活结合底物，并且在有空间位阻的情况下能结合地更好。9、荧光标记荧光标记可用于追踪活细胞内多肽，也可用于研究酶和作用机制。色氨酸（Trp）带有荧光，因此可以被用于内在标记。色氨酸的发射光谱取决于**环境，随着溶剂极性降低而降低，这种性质对于检测多肽结构和受体结合很有用处[12]。色氨酸荧光可以被质子化的门冬氨酸和谷氨酸淬灭，这可能会限制其使用。丹磺酰氯基团（Dansyl）与氨基结合时具有高度荧光，也常被用于氨基酸或蛋白质的荧光标记。荧光共振能量转换（FRET）对酶的研究十分有用，应用FRET时，底物多肽常含有一个荧光标记基团和一个荧光淬灭基团。标记的荧光基团会被淬灭剂通过非光子能量传递淬灭。当多肽从所研究的酶上解离下来，标记基团就会发射荧光。10、笼形多肽笼形多肽有光学移除性的保护基，光学移除性保护基可以屏蔽多肽与受体的结合。当受到UV照射时，多肽会被活化，恢复与受体的亲和力。由于这种光学活化可以根据时间、振幅或者位置来控制，因而笼形多肽可以被用于研究细胞内发生的反应[13]。**常用于笼形多肽的保护基是2-硝基苄基及其衍生物。

    与人类疾病相关的mtDNA突变的分布往往具有**特异性。同源核假基因干扰：mtDNA基因中存在一些核假基因，这些假基因与mtDNA的编码部分具有高度序列同源性。这些假基因的序列读取使mtDNA突变位点的检测更加复杂化。进行完整mtDNA富集为了确保低丰度mtDNA突变的检测不受核假基因的干扰，许多研究人员采用传统的氯化铯密度梯度离心法来富集mtDNA，或在NGS二代测序前通过PCR富集特异性的mtDNA序列，该方法虽然是mtDNA富集的金标准，但是整个富集流程所需试剂多，操作繁Sa琐且耗时。提供与梯度离心相当的富集得率，且手工操作的时间***低于密度梯度离心法。图整个工作流程完全自动化，*包含，以及。提取结果由illumina和ONT两大测序平台进行测序分析后，结果显示，大部分的二代测序突变结果会在三代测序结果上证实。但是，部分三代测序测得的突变未在二代测序结果中检出。上部分是ONTMinION测序的结果，下图是illuminaMiSeq测序的结果结果表明：可以用来富集完整的人源mtDNA，文中我们采用简单易分离的WBC（白细胞）作为上样样本，进行mtDNA纯化的过程是完全自动化的，可获得与繁琐耗时的金标准——氯化铯密度梯度离心法同样纯度等级的mtDNA。

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