–新载玻片上有油污，要用洗液浸泡12～24h，自来水冲洗后再用蒸馏水清洗；用绸布擦干或烤箱烤干。清洁的载玻片再用粘附剂处理。·常用的粘附剂有：–APES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）–Polv-L-Lysine（多聚赖氨酸）–铬明胶溶液APES(3-aminopropyltriethoxysilane)3-氨丙基三乙氧基硅烷·现用现配。用纯**或甲醇配制2%APES(v/v);·将洗净的玻片浸于此液中20～30秒钟；·取出稍停片刻，再入纯**酮溶液洗去未结合的APES，置通风橱中晾干或60C烤箱烤干。Polv-L-Lysine(多聚赖氨酸)·将清洁玻片浸于100g/ml(10%w/v)的多聚赖氨酸溶液中(去离子水稀释)，37C放置30min，然后60C烤箱烘烤1h或室温过夜干燥。装盒备用。铬明胶溶液·试剂：铬明矾(chromealum)明胶(gelatine)蒸馏水500ml·先将铬明矾溶解于40C少量蒸馏水中，再加入明胶及蒸馏水，可在70C水浴中使明胶溶化，搅拌均匀后，即可使用。如有残渣，可过滤后再用。·用时稍加溶化，湖北六色免疫组化，湖北六色免疫组化，湖北六色免疫组化，切片浸入2～3min，过夜晾干。免疫细胞化学技术冰冻切片·冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接切片。·在切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程。–缩短了制片时间–抗原性不受损失·对稳定性差的抗原。

免疫组化，是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使结合抗体的显色剂进行显色来确定组织或细胞内抗原，对其进行定位、定性及相对定量的研究。是生命科学研究中常用且重要的实验方法。

但是要想得到好的实验结果，并不是那么容易。

因此，我们为您准备了丰富的实验课程大餐，将重点讲述 IHC 原理，操作流程，注意事项，疑难解答。在讲解过程中我们会用详实的实验数据向您展示在影响实验结果的关键因素。通过这些课程，您将掌握：正确的IHC实验操作方法；IHC实验成功的关键因素；常见问题分析及解决的能力；

    在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景染色。（注：孵育不要超过10分钟，否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有5－10%正常羊血清，这一步可以省略。）6.缓冲液洗5min/2次。7.滴加一抗工作液37℃孵育1－2小时。（具体孵育时间和温度由试验者**终决定）8.缓冲液洗5min/2次。9．滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增强子），在室温下孵育20分钟。10．缓冲液洗5min/2次。11．滴加HRPPolymer（酶标二抗），在室温下孵育30分钟。（注：HRPPolymer对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。）12．缓冲液洗5min/2次。13．向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate)中滴加1-2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混匀后滴加到切片上，孵育3－15分钟。（具体时间由染色深浅决定。）14．自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。免疫组化操作步骤⑴、石蜡切片脱蜡至水。⑵、3%H2O2室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。⑶、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟x2（如需抗原修复，可在此步后进行）。⑷、5-10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟，倾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。⑸、PBS冲洗，5分钟x3次。

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