传统方法与新方法对比：传统的全局染料处理方法在测量细胞内离子浓度时，存在信噪比低的问题，尤其是在检测低浓度离子时。文献10指出“荧光染料通常用于生化测量，例如pH和离子浓度。它们，特别是当用于检测低浓度的离子时，具有较低的信噪比（SNR）”。而新的方法，如使用少量的荧光染料涂层磁性纳米颗粒进行点播，可以准确地聚集纳米颗粒，从而在细胞内局部区域内进行荧光染料的细胞内测量，能够实现明显更高的SNR和更低的细胞毒性11。磁微操纵系统的应用：与现有的产生大群（几个微米以上）或无法将产生的群移动到任意位置的磁微操纵系统不同，文献10中发明了一种五极磁微操纵系统和技术来产生小群（例如1µm；能够产生从0.52µm到52.7µm的磁群，误差＜7.5％）并精确定位小群（位置控制精度：0.76µm）。这种系统可以使用不同的荧光染料涂层磁性纳米颗粒进行细胞内离子浓度的定位测量。合成了一系列含不同胺基取代的磷氧化物桥连罗丹明（P-rhodamines）染料。浙江荧光染料荧光素酶

影响成像的清晰度提高图像对比度：稳定的荧光染料可以在较长时间内保持较高的荧光强度，使得目标组织与周围组织之间的对比度更高。例如，在ATP荧光纳米探针基于ZIF-90和近红外染料用于**小鼠成像的研究中，CP@ZIF-90纳米探针具有***的光稳定性和化学稳定性，在检测ATP时具有**长的发射波长（705nm）和比较大的荧光增强（32倍），能够成功用于活细胞（293T和CT26细胞）中内源性和外源性ATP水平的实时荧光成像2。相比之下，不稳定的荧光染料可能会随着时间的推移而减弱荧光强度，降低图像的对比度，使得目标组织难以清晰地显示出来。增强图像分辨率：稳定的荧光染料有助于提高成像的分辨率，使图像更加清晰地显示动物体内的细微结构。例如，在多光谱光声成像小动物中荧光染料的研究中，通过多光谱方法对目标发色团和荧光染料进行灵敏区分，以25fmol的灵敏度和150μm的空间分辨率对小动物中荧光染料的深度分辨分布进行成像5。如果荧光染料不稳定，可能会导致成像分辨率下降，无法清晰地显示动物体内的细微结构，影响对疾病的诊断和研究。天津脂溶荧光染料通过将大肠杆菌与有机荧光染料尼罗红共孵育，在超分辨率显微镜下实现了大肠杆菌细胞壁的荧光标记。

DiI染料标记机制DiI（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate）是一种亲脂性的荧光染料，常用于神经元标记。在大鼠中，通过结晶状的荧光DiI可以对牙初级传入神经元（DPANs）进行逆行荧光标记。在小鼠中，虽然也可以使用DiI进行标记，但之前*能使用Fluoro-Gold这种具有神经毒性的荧光染料，且其膜穿透特性优于碳菁染料。后来研究人员对DiI在大鼠中的标记技术进行了重新评估，旨在将其应用于小鼠。新型的DiI配方具有改进的穿透性能和染色效率，可以评估轴突染料从应用部位到三叉神经节的运输速度、染色的DPANs数量以及荧光强度。其标记机制主要是利用DiI的亲脂性，能够与神经元细胞膜结合，随着轴突的运输而扩散到神经元的各个部位，从而实现对神经元的标记。

荧光染料在细胞内离子浓度测量中起着至关重要的作用，不同种类的荧光染料在测量细胞内离子浓度时存在多方面的具体差异。以下将从多个角度进行详细阐述。一、测量的离子种类不同钙敏感荧光染料：文献0提到“Calciumsensitivefluorescentindicatorssincecalciumisthemostcommonlystudiedion”，即钙敏感荧光指示剂是**常被研究的离子之一。这类染料主要用于测量细胞内的钙离子浓度。例如在实验中，将细胞注入钙敏感荧光染料后，在高倍显微镜下观察，通过过滤特定带宽的照明光激发染料分子，使其发出荧光，从而测量钙离子浓度1。氢离子敏感荧光染料：在一些研究中，也有用于测量细胞内氢离子浓度的荧光染料。文献10提到“该系统使用1µm的pH敏感荧光染料涂层磁性纳米颗粒进行了细胞内pH定位”，这里的pH敏感荧光染料就是用于测量氢离子浓度的，通过这种染料可以确定细胞内的pH值，进而反映氢离子浓度的变化11。不同结构修饰的噁嗪衍生物荧光染料的发色强度和荧光强度也有所不同。

在近红外二区的应用潜力动态成像：通过扩展π共轭和增强分子内电荷转移效应，开发了一系列新的基于氧杂蒽的近红外二区染料，如VIXs。其中，VIX-4具有在1210nm的荧光发射和高亮度，可用于动态成像小鼠的血液循环，具有高时空分辨率，能够区分动脉和静脉，并测量血流体积22。***成像研究：设计构建了若干基于氧杂蒽骨架的近红外二区荧光团（命名为VIX），开展了其在***成像中的应用研究。例如，探针VIX-S在水和固体形式都能发出近红外二区荧光（约1057nm），且展现了较好的抗淬灭效果、化学稳定性和光稳定性，成为推荐的生物成像探针。基于探针VIX-S的小鼠***成像研究表明，该探针具有特异性地在脾脏中积累的特点，能够对***小鼠的脾脏进行成像，为动物***的脾脏研究提供新的工具25。综上所述，新型近红外氧杂蒽荧光染料在细胞荧光成像中具有避免生物组织自发荧光干扰、良好的细胞靶向荧光标记效果、用于特定细胞和疾病的检测与成像、支持超分辨率成像以及在近红外二区的应用潜力等广阔的应用前景。使用双重荧光染料标记的氧化铁磁性纳米颗粒（MNP），研究荧光检测在程度上可以反映其在生物动物中的命运。辽宁荧光染料Fluor 680

些噁嗪衍生物荧光染料在手术中能够定位并识别出神经结构，从而在术中保留神经的完整性。浙江荧光染料荧光素酶

引入特定基团增加空间位阻：以一个兼顾光稳定性和水溶性的五甲川吲哚菁染料为母体，在中间共轭甲川直链引入氯原子和溴原子来增加染料分子的空间位阻，从而增强染料的光稳定性。由此合成出来了一系列新型近红外菁染料，且这类菁染料的斯托克斯位移大于普通多甲川菁染料24。引入大空间位阻基团提高光稳定性：设计合成的染料是以吲哚为母核，通过在母核的N原子上引入空间位阻大的苄基及其衍生物来提高染料的光稳定性。循环伏安测试表明，合成的五甲川吲哚菁染料相对于中间共轭链有环己烯的七甲川菁染料有更好的光稳定性，同时也证明在吲哚环N原子引入苄基及其衍生物确实比引入直链烷基有更好的稳定性24。浙江荧光染料荧光素酶

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