阳离子壳交联的类Knedel纳米粒子作为转染试剂结合机制:阳离子壳交联的类Knedel纳米颗粒(cSCKs)含有不同百分比伯胺和叔胺,通过与siRNA结合来发挥作用18。含100%伯胺的cSCK在HeLa细胞中的沉默效率比较高,能够抑制人血清中siRNA降解以及转染HeLa和小鼠巨噬细胞系。与融合的GALA肽复合可以增强iNOS在较低siRNA浓度下的siRNA沉默,这被证明可以增强摄取后的内体逃逸,进一步说明其结合机制可能涉及与siRNA的紧密结合以及促进细胞内转运。作用特点:cSCK-pa100在HeLa细胞、293T细胞和人支气管上皮(HEK)细胞中显示出比Lipofectamine2000更高的沉默效率,但在人支气管上皮(BEAS-2B)细胞和人乳腺上皮(MCF10a)细胞中可比。在小鼠巨噬细胞系中,cSCK-pa100表现出更大的iNOS沉默,并提供了更好的保护免于血清降解,证明了其作为siRNA转染剂的潜在用途。综上所述,不同类型的阳离子RNA转染试剂在结合RNA分子的机制上存在差异,主要涉及静电相互作用、纳米复合物形成以及与其他分子的协同作用等方面。这些差异导致了它们在转染效率、细胞毒性、对不同细胞类型的适用性等方面的不同特点。核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。四川细胞转染试剂
诱导交替剪接和恢复功能蛋白:某些转染试剂在将RNA导入细胞后,可诱导特定的生物学效应。例如,2'-OMeUtaPS介导的转染,在HeLapLuc705细胞中,转染的反义PMO序列诱导了编码萤光素酶的前mRNA的外显子23的交替剪接,恢复功能性萤光素酶的生产,而不会损害细胞毒性5。在肌营养不良症mdx小鼠模型的肌管肌肉细胞中,靶向聚A尾PMO序列针对编码肌营养不良蛋白的前mRNA的剪接位点,触发交替剪接事件,导致突变外显子(外显子23)从pre-mRNA中切除并产生功能性肌营养不良蛋白2。提高转染效率和减少细胞死亡:为了优化并促进将病毒RNA导入哺乳动物细胞,研究人员比较了不同的市售RNA转染试剂将黄热病病毒(YFV)和丙型肝炎病毒(HCV)RNA复制子递送至Huh7细胞的能力,并与电穿孔进行比较。结果发现,如果适当优化,某些试剂将优于电穿孔,细胞死亡少得多,RNA需求少,转染效率提高3。江苏转染试剂性价比高纳米颗粒,由于其在DNA转运到细胞中的保护能力,在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。
鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞:在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但转染试剂对细胞有一定毒性作用。相同用量的RNAiFectTM和SuperFect两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长影响远远小于对CEF细胞的影响。两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3ul。两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染111316。MEF细胞、3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞:分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,流式分析发现MessageMax的转染效率略高于RNAiMax,但两者没有统计学差异。但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂。MessageMax能将modGFP高效转染入3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞中,并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位。
动物视网膜成像技术为基础研究提供了有力工具。从小鼠视网膜多种成像方式探讨眼科光学成像技术进展:张鹏飞、张廷玮、宋维业阐述了近年来在小鼠和人眼视网膜高精度光学成像领域出现的技术突破6。几种在人眼视网膜成像中广泛应用的光学成像技术在动物视网膜中得到了成功应用,实现了对动物视网膜的高精度细胞级别成像,为科研工作者提供了有力工具。同时,动物视网膜的研究工作也开发了一些新型成像技术或增强了对人眼视网膜功能机理的理解。综上所述,动物成像技术在磁共振成像、热成像、X射线发光成像、近红外高光谱成像、非人灵长类动物超高场磁共振脑成像、新型动物摇篮的小动物多重成像、红外成像以及动物视网膜成像等方面都取得了***的发展,为动物研究和相关领域的发展提供了重要的技术支持。RNA 转染试剂在不同实验环境下表现出不同的效果。
磁共振成像(MRI)技术磁共振成像技术是目前较为先进的医学影像技术之一,在动物成像中也得到了广泛应用。优化实验动物眼部磁共振成像技术:王战京、雷建锋、焦昆的研究通过改进实验动物眼部的磁共振成像技术,提高了眼科疾病研究的准确性,并促进了新治疗方法的研发1。他们选用了健康的SD大鼠,利用Bruker7.0TMRI扫描仪进行检测,通过精确的定位和细致的扫描参数调整,对比了T2WI与FLASH两种成像技术。研究结果显示,FLASH序列在眼部结构成像中展现出更高的信噪比,从而提供了更为清晰的图像和更丰富的组织细节。3T动物磁共振成像传导冷却超导磁体研究:陈顺中、王秋良、孙万硕采用传导冷却技术研制了一台3T动物磁共振成像超导磁体9。该磁体采用主动屏蔽型结构,包含同轴排列的6个主线圈和2个屏蔽线圈。研究还采用了分段和失超传播加速策略的被动失超保护方法,保护超导磁体免于意外失超造成的损害。低温系统使用双极G-M制冷机直接将超导磁体从室温冷却到工作温度,无需液氦。实验结果显示,该超导磁体在直径φ180mm的球形区域产生高均匀度磁场用于成像。由于CRISPR/Cas的发现,基因组编辑领域经历了一场变革。辽宁悬浮细胞转染试剂
与DNA转染类似,RNA可以通过基于RNA的病毒或非病毒载体导入真核细胞。四川细胞转染试剂
选择合适的转染试剂GenMute试剂在人肝*细胞模型中的应用:在人肝*细胞HepG2和Huh7.5中,研究对比了脂质体类的Lipofectamine™RNAiMAX和HepG2特异性的聚合物类GenMute™两种转染试剂30。通过细胞成像分析发现,GenMute处理的细胞对荧光标记的阴性对照siRNA的摄取高于LipofectamineRNAiMAX转染的细胞。并且,MTT实验表明,GenMute转染的细胞比LipofectamineRNAiMAX处理的细胞具有更高的存活率。这提示在人肝*细胞模型中,GenMute试剂可能是更适合的转染试剂,在提高转染效率的同时降低了细胞死亡。siRNA共轭壳聚糖纳米颗粒在脊髓损伤模型中的应用:在创伤性脊髓损伤(SCI)模型中,通过制备带有抗体靶向部分的siRNA共轭壳聚糖复合物,以抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,该复合物主要靶向M1巨噬细胞31。实验结果表明,Ab-siRNA共轭壳聚糖纳米颗粒在体外***降低了M1极化巨噬细胞中的iNOS表达,具有高转染效率和低细胞毒性。在体内应用该纳米颗粒后,SCI后的iNOS表达和细胞凋亡均减少。这说明在特定的病理模型中,针对性设计的纳米颗粒转染试剂可以在提高转染效率的同时降低细胞死亡。四川细胞转染试剂
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