所描述的实施例**是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。实施例1一种优化的谷氨酸发酵培养基,其包括发酵培养基a和发酵培养基b;所述发酵培养基a首先添加,然后间隔24h添加发酵培养基b。所述发酵培养基a的制备方法为:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,2-羟基乙胺40mg/l,cecl310mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;将各原料搅拌均匀后,调节ph为,121℃**15min,自然冷却,制得发酵培养基a;所述发酵培养基b的制备方法为:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,壳聚糖80mg/l;将各原料搅拌均匀后,调节ph为,121℃**15min,自然冷却,制得发酵培养基b;采用常规发酵工艺:将黄色短杆菌gdk-9按8%接种量将种子液(od600nm为)接入装有60l发酵培养基a的100l发酵罐中进行发酵培养,发酵培养24h,然后添加10l发酵培养基b,继续发酵培养24h,收集发酵液;整个发酵培养过程中,控制发酵温度35℃,通风比1∶,搅拌转速300r/min,溶氧维持在20%。RPMI1640培养基在免疫细胞培养中表现出色。河北F12培养基技术指导
二氧化碳不断被释放,培养液变酸,pH值发生变化。酚红是细胞培养基中**常用的pH指示剂,但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断,需要实验员的经验积累,存在较大的主观性。实际上,个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红,只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测,结果更为准确可靠。缓冲能力细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸,细胞培养液pH很快下降;打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统,按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值:H2O+CO2→H2CO3⇌H++HCO3-NaHCO3⇌Na++HCO3-此外,还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低,在细胞培养中应用得更为***。另一种较为常用的缓冲液是HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)液,它是一种非离子两性缓冲液,在pH~。高浓度的HEPES可能对细胞**性作用,细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10~25mmol/L。渗透压细胞必须生活在等渗的环境中,大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示。宁夏基础培养基进口DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。
促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s4中,将s3中的无菌外植体接入增殖培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免增殖培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应增殖培养基,促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s4中,每隔8~12周转接入新的增殖培养基。通过采用上述技术方案,经过8~12周后,增殖培养基的效果将会减弱,植物材料也会污染增殖培养基,需要及时更换。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s5中,将s4中的绣球组培苗接入生根培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养8~12周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免生根培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应生根培养基,促使植物材料快速生长、芽体健壮。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s2中,外植体消毒的具体步骤为将树莓外植体叶片剪去,自来水冲洗干净。
附图说明图1是1/2cs和1/2ms两种培养基上,哥伦比亚型拟南芥无菌苗培养的对比效果图,a:无菌苗在培养基中生长情况;b:无菌苗莲座叶及根系发育;c:萌发率;d主根长度;a和b中bar=;图2是1/2cs和1/2ms两种培养基上,兰兹贝格型拟南芥无菌植株培养的对比效果图,a:无菌植株在培养基中生长情况;b:无菌植株地上部分及根系发育;c:无菌植株花***发育(左)和花粉的亚历山大染色(右);d:主根长度;e:株高;f:莲座叶长度;g:成熟花粉活力;a中bar=、b中bar=、c中花***bar=、c中花粉bar=15um;图3是1/2cs和1/2ms两种培养基上,油菜无菌苗培养的对比效果图,a:无菌植株在培养基中生长情况;b:无菌苗地上部分及根系发育;c:茎高;d:茎中粗;e:主根长;f:大于;a中bar=、b中bar=;图4是1/2cs和1/2ms两种培养基上,马铃薯无菌苗培养的对比效果图,a:无菌植株在培养基中生长情况;b:无菌苗地上部分及根系发育;c:茎高;d:茎中粗;e:根数;a和b中bar=;图5是cs和ms两种培养基上,哥伦比亚型拟南芥叶片及根愈伤**诱导的对比效果图,a:叶片愈伤**;b:叶片愈伤**诱导率;c:根愈伤**;d:根愈伤**诱导率;a和c中bar=;图6是cs和ms两种培养基上。无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验。
在s3中,将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养,诱导培养基的配方为ms+,诱导培养基的ph值为,在s4中,将s3中的无菌外植体转接到增殖培养基中,增殖培养基的配方为ms+~~,增殖培养基的ph值为,在s5中,将s4中的绣球组培苗放入生根培养基中,生根培养基的配方为1/2ms+~~,生根培养基ph值为。通过采用上述技术方案,通过液体**培养技术,以芽为原材料,获取方便,增殖倍率高达8~10倍,生根率达到95%以上,苗木规格整齐,性状保持稳定,同时节省成本,适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。诱导培养基萌芽率能达到90%,可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基,绣球组培苗增殖倍率能够达到8~10倍,组培苗高度一致,生长健壮。使用本生根培养基,绣球组培苗生根率能够达到95%,根系发达,健壮,可以成功用于移栽大棚。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s3中,将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养6~8周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应诱导培养基。无血清培养基适合于需要无血清环境的细胞系。宁夏基础培养基进口
使用减血清培养基能减少实验中的血清干扰。河北F12培养基技术指导
所以做过强检的**器还必须进行**效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提**器,往往仪器指针达到所需的温度,但**物品的实际温度却未达到要求。导致**物品不彻底,影响实验结果。培养基**不彻底,影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气**器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。(三)**时的注意事项使用高压蒸气**器时,首先应注意在开放蒸气的同时,排除**器内的冷空气。必须将器内冷空气全部排除后,才可关闭排气孔。假如**器内仍存留有部分空气时,刚压力表上虽已达到了某一压力值,但器内之温度仍未达到相应之度数。存留的空气越多,刚二者相差也越大。差也越大,器内温度不足,**则不彻底。表蒸汽压力与温度的关系蒸汽压力(kPa)密度(kg/cm2)温度(℃)1126表高压蒸汽**器中温度与冷空气排出量的关系蒸汽压力(kPa)所达温度。河北F12培养基技术指导
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