1、细胞培养过程中为什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上与培养皿壁结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时，细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力可成为球形。图1.胰酶酶切位点2、使用胎牛血清培养细胞，在使用胰酶消化时发现血清可以终止此过程，这是什么原因？血清终止的原理其实是竞争抑制，就是用过量的牛血清中含有的蛋白和胰酶结合，使胰酶失去消化细胞蛋白的机会。3、为什么使用了胰蛋白酶消化，细胞还是成团的，这可能是什么原因导致的？①消化时间不够②吹打力度不够③胰酶消化液浓度不够④细胞密度过高之后才消化传代⑤胰酶存储不当，或者使用了过期胰酶胰酶浓度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。江苏国产胰酶哪个好

0.25%胰酶是细胞生物学中常用的一种生物试剂，下面汇总一下胰酶使用过程中常见的一些问题。胰酶的使用浓度是多少？胰酶浓度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。为什么收到的胰酶会有颜色差异？商品化胰酶溶液需要用干冰运输，在运输过程中，胰酶溶液中的二氧化碳与干冰挥发的二氧化碳可能会极少部分的气体交换，导致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚红作为PH值指示剂，因此胰酶PH的变化是肉眼可观察到的。由干冰运输过程中导致的PH值的变化很小，PH值会从7.2-8.0变化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的时候，溶液呈淡红色；PH值6.8左右时呈淡黄色。因此胰酶颜色的变化是由PH值的变化引起，归因于使用干冰运输。这种颜色的变化是行业普遍现象，在不同供应商的胰酶产品都会出现。江苏国产胰酶哪个好胰酶使用的时候要注意什么？

细胞传代消化时所用胰酶浓度?常见浓度为0.25%的胰酶(含有螯合剂)，半贴壁细胞或者对胰酶敏感的细胞，可采用0.05%浓度的胰酶(含有或者不含有螯合剂)进行细胞消化。由于细胞膜上的粘附蛋白需要金属离子维持其活性，常见的胰酶中含有EDTA等整合剂,如果细胞贴壁不是非常紧密，也可用不含有螯合剂的胰酶进行细胞消化。胰酶对细胞膜上粘附蛋白的损害比较大，如果进行细胞膜上蛋白的研究，建议选择温和的细胞消化试剂，尽量减少对细胞膜上蛋白的损伤。此外，由于胰酶自身也是一种蛋白，胰酶也会自己剪切自己,建议胰酶不要反复冻融，拿到手中的大瓶胰酶进行分装使用。除了常见的胰酶(含有或者不含有EDTA)。

在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在PH 8.0和37℃时，胰酶的作用能力**强，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。胰蛋白酶消化液都由已经过猪细小病毒检测和支原体检测的原料制备。

    使**或细胞片分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液，视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多（依培养器皿的大小而定），以使充分浸润；一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶底由半透明（细胞单层连接成片）转为透明、点状（出现细小空隙）时，弃去细胞消化液，或看见培养瓶壁呈白茫状即可。并加入适量的完全培养液终止消化，吹打分散；如见大量细胞片状脱落，已消化过头，则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作。（消化过头，可造成大量细胞从瓶壁上脱下，甚至造成细胞破碎。由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂，所以加入完全培养基可以终止反应。胰酶配置方法：1、培养液配制，方便好用，对细胞影响小，并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制，要先调ph值（①胰酶（1：250）克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时，调pH，过滤**。）3、pbs（：称取胰酶粉末。胰蛋白酶是一种异源蛋白酶，与培养皿结合可以降解细胞膜上的蛋白质。吉林EDTA胰酶采购

EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。江苏国产胰酶哪个好

    冰冻保存，但不得反复冻融。供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，加。测定法取底物溶液、（pH）1ml，混匀，作为空白。取供试品溶液（预热至25℃±℃），立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25℃±℃，照紫外－可见分光光度法（2010年版*典二部附录ⅣA），在237nm的波长处，每隔30秒读取吸光度，共5分钟，每30秒钟吸光度的变化率应恒定，且恒定时间不得少于3分钟。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。式中P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量，单位；A2为直线上开始的吸光度；A1为直线上终止的吸光度；T为A2至A1读数的时间，分；W为测定液中含供试品的量，mg;，吸光度每分钟改变，即相当于1个糜蛋白酶单位。每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。干燥失重取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过（2010年版*典二部附录ⅧL）。胰蛋白酶效价测定底物溶液的制备取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐，加水溶解使成100ml，作为底物原液；取10ml，用磷酸盐缓冲液（取，pH值为）稀释成100ml，照紫外－可见分光光度法（2010年版*典二部附录ⅣA），恒温于℃±℃，以水作空白。江苏国产胰酶哪个好

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