为什么缓冲溶液的ph值在4.75~7.25之间？

缓冲溶液的缓冲范围在PKa±16531=4.75±1之间。水合氢离子的浓度取决于弱酸与其共扼碱的浓度比。当加入少量强碱时，酸被中和，导致了氢氧根离子在溶液中很少累积。从而C（A一）的浓度增加，C（HA）的浓度减少。可以看到，虽然加入了强碱，但是溶液里的氢氧根离子变化很少，同时，浓度较大，相对的变化小，两者比值几乎无变化，因此根据公式，水合氢离子的浓度变化很小。所以缓冲溶液的ph值在4.75~7.25 在生物化学研究中,为什么要使用缓冲液?在使用缓冲液时应注意那些问题?无酚红缓冲液包括

    1MTris-HCl(,,)组份浓度：1MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.称量gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。4.将溶液定容至1L。5.高温高压**后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低。10&timeTEBuffer(,,)组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压**。4.室温保存。MTris-HCl()组份浓度：MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.称量gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至。4.将溶液定容至1L。5.高温高压**后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低。3M醋酸钠()组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压**后，室温保存。缓冲液哪家好为什么缓冲溶液可以维持PH值的稳定呢？

做ELISA确定抗原**佳包被浓度，做方阵滴定具体怎么做呢？选择好一份已知为阳性和阴性背景的标本，将你的抗原用1*CBPH=*PBPH=（8个条件）后加入96孔板每孔100ul。（一般包被浓度100ng抗原或抗体/孔，**优包被条件需进行试验选择）4度过夜取出后甩干，加入20%NBS封闭每孔200ul。37度2h热封，甩去后拍干即可。将你HRP或AP标记的抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释（倍比稀释4个梯度）即可。棋盘滴定就是板酶交叉,同时带上阳性、阴性通过试验确定**佳P/N的包被搭配E的试验2．抗原和抗体**佳工作浓度的确定?抗原抗体反应要求在**适比例条件下进行，ELISA反应试剂多，其工作浓度不同对结果影响较大，因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行**佳工作浓度的滴定和选择，以达到**佳的测定条件。?1）方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释。

    1:50～l:800)后，按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照)，保温，洗涤。加工作浓度酶标抗体，洗涤，加底物显色，加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值；为0．8左右，阴性参考血清A值<0．1的包被抗原稀释度为工作浓度。?方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg／L、lmg／L、／L三个浓度按行包被，每一个浓度包被三行(每行3孔)，分别在每个浓度包被的***、二、三行中分别加入强阳性抗原，弱阳性抗原和阴性对照，将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l000、l:5000、l:10000三个浓度，分别加入每个浓度包被的***、二、三列中。加底物显色，加酸终止反应，分别读取A值。以强阳性抗原液A值在，阴性参考A值<**适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的**佳工作浓度。?二、ELISA**适工作浓度的选择及标准化操作1**适工作浓度的选择?1．1间接法测抗体?????酶标抗体工作浓度的选择：①用IgG进行包被，洗涤。②将酶标IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中，保温、洗涤。③加酸终止反应后，读取吸光度(A)。读取A值在1．0时的酶标抗体稀释度，作为酶标抗体的工作浓度。在‌酶活性实验中，‌缓冲液的主要作用是‌维持实验环境的pH稳定‌。

在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱，其溶液pH值变化不大，但若加入酸，碱的量多时，缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol.L-1HAc和0.1mol.L-1NaAc组成的缓冲溶液，比0.01mol.L-1HAc和0.01mol.L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大，否则，不能忽视离子间的作用。组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH**小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算：此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系pH=pKaφ±1弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系pOH=pKbφ±1例如HAc的pKaφ为4.76，所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76～5.76的缓冲溶液，在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力比较大，此时（c（HAc）/c（NaAc）=1。PB缓冲液：是普通的缓冲溶液，在化学反应、合成反应等化学领域广泛应用。无酚红缓冲液包括

什么是缓冲溶液?请简述其在生物体中的作用。无酚红缓冲液包括

三、缓冲液使用中的注意事项在实际工作中有些分析人员由于不大了解缓冲溶液的作用机理，当所配制和使用的缓冲溶液与规定的数值不相符时，为使缓冲溶液达到要求，就用盐酸或氢氧化钠等强酸、强碱进行调节,以为这样做可以使缓冲溶液尽快达到所需要的pH值，然而，结果却适得其反，这样的溶液pH值虽然调对了，可是它的缓冲体系却被破坏了，作用也就失去了，缓冲溶液一般都是由弱酸及其弱酸盐或是弱碱及其弱碱盐组成的一对共轭体。使用缓冲溶液的注意事项：不少缓冲溶液都含有易挥发组分，如，氨-氯化铵中的氨酷酸-醋酸钠中的醋酸。现在，不少实验室引入了定量加液器，用定量加液器加试剂，具有简便准确误差恒定的特点，特别是在做成批样品时更显出它的优越性，不少同志也喜欢用它来加缓冲液，但是，应注意缓冲液不能长久存放在定量加液器中，因该器皿不密闭，易造成氨的挥发（醋酸-醋酸钠缓冲液中的醋酸也同理），从而，导致溶液失效，正确的做法是缓冲液应适量配制，使用后及时密闭并置于低温中保存。无酚红缓冲液包括

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