1:50～l:800)后，按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照)，保温，洗涤。加工作浓度酶标抗体，洗涤，加底物显色，加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值；为0．8左右，阴性参考血清A值<0．1的包被抗原稀释度为工作浓度。?方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg／L、lmg／L、／L三个浓度按行包被，每一个浓度包被三行(每行3孔)，分别在每个浓度包被的***、二、三行中分别加入强阳性抗原，弱阳性抗原和阴性对照，将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l000、l:5000、l:10000三个浓度，分别加入每个浓度包被的***、二、三列中。加底物显色，加酸终止反应，分别读取A值。以强阳性抗原液A值在，阴性参考A值<**适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的**佳工作浓度。?二、ELISA**适工作浓度的选择及标准化操作1**适工作浓度的选择?1．1间接法测抗体?????酶标抗体工作浓度的选择：①用IgG进行包被，洗涤。②将酶标IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中，保温、洗涤。③加酸终止反应后，读取吸光度(A)。读取A值在1．0时的酶标抗体稀释度，作为酶标抗体的工作浓度。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞中是不同的.新疆PBS缓冲液市场报价

    3.高温高压**后，4℃保存。SolutionI(质粒提取用)组份浓度：25mMTris-HCl（),10mMEDTA,50mMGlucose配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.高温高压**后，4℃保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml)。SolutionII(质粒提取用)组份浓度：200mMNaOH，1%(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加**水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间比较好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌SolutionIII(质粒提取用)组份浓度：3MKOAc,5MCH3COOH配制量：500ml配制方法：1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压**后，4℃保存。MEDTA()组份浓度：MEDTA配制量：1L配制方法：1.称取gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至（约20gNaOH)。注意：pH值至，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压**。6.室温保存。1MDTT组份浓度：1MDTT配制量：20ml配制方法：1.称取gDTT，加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的MNaOAc（)。四川有酚红缓冲液答疑解惑如果加入的酸或碱量过多，缓冲溶液的缓冲能力会降低，pH值会发生变化。

ph值缓冲液常用三种

pH酸碱度常用的三种标准溶液：pH分别为4.0、7.0和10.0。标准缓冲液（应选择与供试液pH值接近的标准缓冲液），目前标准溶液有7种，在我国一般使用以下3种溶液：（pH值在25℃时）。1.邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）pH4.003；0.05M。2.混合磷酸盐（Na2HPO4）：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液pH6.864；0.025M3.硼砂（Na2B4O7·l0H2O）pH9.182；0.01M。三种标准缓冲液的配置方法：1.pH4，邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液：精密称取在115±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾[KHC8H4O4]10.12g，加水使溶解并稀释至1000ml。2.pH7，磷酸盐标准缓冲液（pH7.4）：精密称取在115±5℃干燥2～3小时的无水磷酸氢二钠4.303g与磷酸二氢钾1.179g，加水使溶解并稀释至1000ml。3.pH9，硼砂标准缓冲液：精密称取硼砂[Na2B4O7·10H2O]3.80g（注意：避免风化），加水使溶解并稀释至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免与空气中二氧化碳接触。

    1MTris-HCl(,,)组份浓度：1MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.称量gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。4.将溶液定容至1L。5.高温高压**后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低。10&timeTEBuffer(,,)组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压**。4.室温保存。MTris-HCl()组份浓度：MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.称量gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至。4.将溶液定容至1L。5.高温高压**后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低。3M醋酸钠()组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压**后，室温保存。缓冲液使用中的注意事项。

    从中选取包被抗体浓度和酶标抗体的稀释度。为了进一步节省试剂，可以此浓度为基点，缩小间距再进一步做棋盘滴定。?2测定方法的标准化?2．1加样?????ELISA中除了包被外，一般需进行96孔加样。定性测定中有时不强调加样量的准确性。例如规定为加样1滴，如不具备相当的条件，要尽量使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中，加样量应力求准确，**好采用量程准确的微量移液器。加样时应将液体加在孔底，不要加在孔壁上部，避免出现气泡。?2．2保温?????在ELISA中，一般在加标本和结合物后，反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器**好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。如用保温箱，空湿盒应预先放在其，以平衡温度。?2．3洗涤?????洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却是决定实验成败的关键。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯一类物质即避免非特异性吸附，在ELISA中**为常用。ELISA板的洗涤一般可采用以下方法：吸干孑L内反应液；将洗涤液注满板孔；发表评论请自觉遵守互联网相关的政策法规，严禁发布***、**、反动的言论。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统。四川有酚红缓冲液答疑解惑

缓冲溶液是无机化学及分析化学中的重要概念。新疆PBS缓冲液市场报价

淀粉酶活力的测定中缓冲液有什么作用

缓冲液1）缓冲溶液作用原理和pH值当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液.弱酸及其盐的混合溶液（如HAc与NaAc）,弱碱及其盐的混合溶液（如NH3·H2O与NH4Cl）等都是缓冲溶液.由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故.当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H离子基本上被A-离子消耗：所以溶液的pH值几乎不变；当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化.2）缓冲溶液的缓冲能力在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用.这说明它的缓冲能力是有一定限度的. 新疆PBS缓冲液市场报价

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