冷冻与解冻过程中涉及多个环节,包括温度控制、时间控制、冷冻保护剂的添加与去除等。这些环节中的任何一步操作不当都可能导致纺锤体损伤。因此,需要不断优化冷冻与解冻技术,以减少对纺锤体的不良影响。近年来,研究者们通过不断尝试和优化冷冻保护剂的配方,取得了进展。例如,甘油、二甲基亚砜(DMSO)等渗透性保护剂被用于哺乳动物卵母细胞的冷冻保存中,它们能够迅速降低细胞内水分含量,减少冰晶形成。同时,一些非渗透性保护剂如蔗糖、海藻糖等也被发现对纺锤体具有一定的保护作用。纺锤体在细胞分裂后期通过收缩力推动染色体分离。北京核移植纺锤体改善分级
纺锤体观测仪使ICSI更加安全可靠
在进行单精子卵胞浆内注射(ICSI)授精时,**初人们观察人体内成熟的卵母细胞时,通常认为,卵母细胞纺锤**于***极体附近,故传统的ICSI操作是转动卵母细胞使其***极**于6点或12点处,然后在3点处注入精子。但是,在大量使用纺锤体观测仪后发现,***极体并不能很好地预测纺锤体的位置。一项研究提示,在ICSI后,用纺锤体观测仪观察纺锤体与***极体的夹角,结果发现小于30°这组卵母细胞的正常受精率更高。极体在卵周隙中的移动,或者纺锤体在胞质中的易位都使两者的位置关系发生改变,普通光学显微镜下ICSI穿刺部位的选择,可能会损伤纺锤体和(或)造成染色体的异常。通过纺锤体观测仪,可以精确地对卵母细胞中纺锤体的位置进行定位,从而避免在ICSI过程中损伤纺锤体,使ICSI更加安全可靠。有文献报道,在进行ICSI时,观察到“双折射纺锤体”的成熟卵母细胞的受精率和质量胚胎率***高于未观察到双折射纺锤体组。也有学者发现,有些卵母细胞在普通光学显微镜下看到是正常的,但在纺锤体观测仪这个“照妖镜”下,就能显出原形,表现为有***极体、但缺乏双折射的纺锤体,这类卵母细胞ICSI后的受精率和妊娠率极低。 北京成熟卵母细胞纺锤体Hoechst染料显微镜下的纺锤体,如同精密的分子机器,引导染色体分离。
纺锤体的完整性决定了染色体分裂的正确性。在有丝分裂前期,中心体被复制形成两个中心体,并逐渐分离,形成两个纺锤体。纺锤体的微管从中心体发出,与染色体上的着丝粒(kinetochore)结合。着丝粒是一组复杂的蛋白质结构,可以与微管的末端结合。当纤维束的微管末端与着丝粒结合时,纤维束开始缩短,将染色体拉向两端,实现染色体的精确分离。这一过程不仅确保了每个新细胞都能获得正确数量的染色体,还保证了遗传信息的稳定传递。
核移植,又称体细胞核移植,是一种将体细胞的细胞核移入去核卵母细胞中的技术。这一技术的关键在于确保移植后的细胞核能够在卵母细胞内重新编程,恢复全能性,并引导后续的胚胎发育。自1996年克隆羊“多莉”诞生以来,核移植技术便引起了全球范围内的关注与研究热潮。纺锤体是卵母细胞在减数分裂过程中形成的关键结构,负责精确分离染色体,确保遗传信息的正确传递。然而,纺锤体对外部环境极为敏感,容易受到冷冻过程中温度波动、渗透压变化及冷冻保护剂毒性等因素的影响而发生损伤。因此,纺锤体卵冷冻技术的成功与否,直接关系到核移植后胚胎的发育潜力和质量。纺锤体微管的动态变化是细胞对外界刺激响应的一部分。
在生殖医学领域,卵母细胞的冷冻保存技术一直是研究的热点之一。尤其是针对卵母细胞内部高度复杂且精细的纺锤体结构,其冷冻过程中的稳定性与完整性直接关系到解冻后卵母细胞的存活率及发育潜能。纺锤体作为卵母细胞内部的关键结构,由微管等高分子物质有序排列而成,具有双折射性。这种特性使得纺锤体在偏振光下能够呈现出独特的形态和特征,从而被Polscope等偏振光显微镜捕捉并观察。双折射性纺锤体的形态、稳定性和完整性对于卵母细胞的正常减数分裂及胚胎发育至关重要。纺锤体微管的动态变化是细胞分裂过程中引人注目的现象之一。北京成熟卵母细胞纺锤体Hoechst染料
纺锤体微管的聚合与解聚受到多种酶的调控。北京核移植纺锤体改善分级
纺锤体观测仪在补救ICSI中的应用
我们知道,成熟的卵母细胞排出***极体。IVF加入精子后,精子会穿透层层障碍**终进入卵子,随着时间的推移,卵子的纺锤体会将染色单体拉向两极,进而排出第二极体,再往后大约加精后9-16小时,雌雄原核会出现,而原核的出现才是受精的标志。但是对于那些没有受精的卵子,到了原核出现的时间窗,发现没有受精时再去补救ICSI,往往错过了卵子的比较好受精时间,因为没有受精的卵子会在体外老化,即使受精,胚胎的发育潜能也很低。所以,我们在加精后的4-6小时,通过观察第二极体的排出来初步判断是否受精,**的增加了那些受精障碍患者的受精率,也避免了卵子的老化。
当然,偶尔也会出现错误补救。文献报道对IVF受精后的未排出第二极体的卵母细胞进行ICSI补救,实验组用纺锤体观测仪观察并统计纺锤体的数目,82.7%含有一个纺锤体,17.3%含有两个纺锤体,并对含有一个纺锤体的卵母细胞进行补救ICSI;而对照组并未用纺锤体观测仪观察纺锤体,只对未排出第二极体的卵母细胞进行补救ICSI。结果发现,使用纺锤体观测仪观察纺锤体的数目能显著提高正常受精率,降低多原核受精比率。 北京核移植纺锤体改善分级
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