常用的消化酶有:胰酶:用得**多的是胰酶。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据干细胞种类、作用温度等因素而变化很大,从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的干细胞,在37度条件下,一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于干细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液,否则影响活性。保存于-20度。胶原酶:胶原酶是比较少用的,一般是用原代培养时,从组织消化下干细胞。这种方法作用温和,对干细胞损伤较小,但是,价格也较贵。中止同样是用血清。胰酶的质量是影响干细胞的消化的关键因素之一,如果配的比较标准,消化的时候就容易消化,反之就不易消化。还要在你看到消化过头的情况下,如果干细胞下来的比较多了,这时可以连同cmf或pbs加上营养液一起传。营养液中有血清,胰酶遇到血清就会自动终止消化,但这样操作对干细胞是有一定的影响的。对于容易消化的干细胞,加入pbs缓冲液洗去血清或加入胰酶,先中和血清的作用(30s),弃之,再加入适量胰酶作用10s-40s(根据细胞消化的难易程度),弃之,这样依赖残余的胰酶就可将干细胞消化单细胞。胰酶用0.05%还是0.25%的?需不需要含酚红的?广东进口胰酶价格
乙二胺四乙酸:(EDTA)是一种有机化合物,常温常压下为白色粉末。它是一种能与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。动物细胞在粘附的时候,需要有Ca或Mg离子的参与,EDTA与他们结合后,导致动物细胞粘附能力降低,再加上胰蛋白酶的消化作用,使得细胞与瓶壁快速脱离。两者起到了协同消化的作用。难消化的细胞,胰酶中可填加EDTA。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没影响,那么可不离心。广东进口胰酶价格通常室温消化3-5分钟就可以消化下大多数贴壁细胞。
只断裂赖氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***过程的羧基参胰蛋白酶降解物分析与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**适pH值~。pH>。Ca2+对酶活性有稳定作用;重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**剂对其活性有强烈**。临床用于抗消肿,工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。胰蛋白酶*典标准胰蛋白酶来源含量本品系自猪、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品计算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。胰蛋白酶制法要求本品应从检*合格的牛、羊或猪胰中提取,生产过程应符合现行版《*品生产质量管理规范》的要求。胰蛋白酶性状本品为白色或类白色结晶性粉末。胰蛋白酶鉴别取本品约2mg,置白色点滴板上,加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液,即显紫色。胰蛋白酶检查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法测定(2010年版*典二部附录ⅥH),pH值应为~。溶液的澄清度取本品,加,依法检查(2010年版*典二部附录ⅨB),溶液应澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制备取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取,混合,pH值为)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀。
6.磷酸酶EDTA相对不溶。可以用磁力搅拌器搅拌,或将其置于4度的冰箱中,溶解后过滤并**。7.可配备2-3倍血浆酶,节省时间和过滤器。使用时,请对PBS消毒。8.将储存溶液储存在-20°C的冰箱中,然后将溶液储存在4°C。使用时,请勿将其放在27°C的水浴中,因为这会使自由基酶迅速无法使用。使用前放置一次。是的,因为添加的数量很少,因此通常不会冻结细胞。9.在消化过程中,向培养瓶中加入适量的胰酶。个人经验,一般在10cm培养皿中加。加入后,立即摇动培养皿盖住胰酶。一旦充满,用负压吸引多余的胰酶排出,将其加入37度培养箱中进行消化。10.请注意,过量的胰酶对细胞有害,而过量的EDTA也会影响粘附,因此无需将细胞浸入血浆酶中进行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用,并具有在37度以下消化的能力。在消化过程中,甚至不需要将一些易于消化的细胞放入培养箱中。请注意,它不能消化太长时间。四、实验所需试剂清单:序列产品名货号CAS备注11000ul蓝吸头FT-10002氢氧化钠JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合树脂chelex100SS6072以上为EDTA-胰蛋白酶的配制,实验请选用高质量试剂。在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是,就是说,尽量不要用水来溶,因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是-,根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的,容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没影响,那么可不离心。3、EDTA的浓度也是质量体积比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意,血清可终止胰酶的作用,但不能终止EDTA的作用,对有些细胞来说,终止消化后的离心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH为8左右的时候**易溶解,在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8,注意,胰酶可使溶液变酸,所以要边溶边测pH,随时调整。注意,不可加过量NaOH,否则过碱,细胞会受不了。6、胰酶EDTA相对比较难溶,可用磁力搅拌器,或放入4度冰箱过夜,待溶解后过滤除菌。7、可配2-3乘的胰酶,这样比较节约时间和滤器,用的时候对上灭菌PBS即可。8、储存液放在-20度冰箱冻存,使用液放在4度,用的时候不要放在27度水浴锅温浴,因为这样会让胰酶很快失效,使用前放在室温下一会,因为加的量很少,所以一般不会冻坏细胞。9、消化时。 胰蛋白酶水解或胰蛋白酶化是蛋白质被胰蛋白酶消化或处理的过程,因此被称为胰蛋白酶化。山东胰酶供应商家
胰酶是一种复合消化酶制剂。广东进口胰酶价格
(含)英文名:(含)储存条件:-20℃产品简介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其**适温度约为37℃。胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()由、除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下1min左右就可以消化大多数贴壁细胞。使用说明(*供参考):1.贴壁细胞的消化①吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,去除残余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液(),略盖过细胞即可,室温放置。(不同的细胞消化时间有所不同)③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。④如果发现消化不足,则加入胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()重新消化。⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落。 广东进口胰酶价格
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