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江苏化学分析蛋白纯化系统上门安装 苏州英赛斯智能科技供应

信息介绍 / Information introduction

三、蛋白质分子量的测定 蛋白质分子量测定的方法很多,目前常用的方法有以下几种。 3.1 凝胶过滤法 凝胶过滤法测定蛋白质分子量的原理如“分离纯化方法”中所 述,江苏化学分析蛋白纯化系统上门安装。一定型号的凝胶颗粒上具有一定大小的孔隙,只允许较小的分子进入胶粒,而大于孔隙的分子则不能进入胶粒而被排阻在胶粒外面。用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质先被洗脱下来,随后能够进入颗粒的蛋白质也按分子量大小而先后被洗脱下来,分子量越小的越后被洗脱下来。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准进行层析分析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线,江苏化学分析蛋白纯化系统上门安装,江苏化学分析蛋白纯化系统上门安装。未知蛋白质在同样的条件下进行层析分析,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量来。

蛋白质分离纯化步骤(二) 2.2 蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。 2.3蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法: 1. 等电点沉淀法 不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。 2. 盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。 3. 有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、**,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作.

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