标题:牛凝血酶(Bovine Thrombin)的高比活应用及其在生物医学研究中的重要性摘要牛凝血酶(Bovine Thrombin),一种高比活度的丝氨酸蛋白水解酶,具有>2000 IU/mg的特异性活性,广泛应用于生物医学研究和临床,本文综述了牛凝血酶的分子特性、在血液凝固中的作用机制以及其在科研和工业生产中的应用。引言牛凝血酶是从牛血浆中提取的酶,分子量为37KD,由两条肽链(31KD和6KD)通过二硫键组成。作为凝血过程中的关键酶,牛凝血酶催化纤维蛋白原(fibrinogen)水解,形成纤维蛋白单体,进而促进血凝块的形成。由于其高度的序列专一性和水解效率,牛凝血酶不仅在生理止血中发挥作用,也作为分子生物学研究中的工具酶。材料与方法产品性质分析:分析牛凝血酶的CAS号、分子量、比活度、外观和纯度等物理化学性质。运输和保存方法:评估牛凝血酶的运输条件和长期储存稳定性。使用方法:探讨牛凝血酶在不同实验条件下的溶解、复溶和消化条件。在蛋白质表达体系中,肠激酶常用于切割融合标签,从而释放出目的蛋白,特别是在pET表达系统中。Recombinant Biotinylated Human CD161 Protein,His-Avi Tag
N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定义(UnitDefinition)1个酶活力单位指在10μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10μg变性RNaseB中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。储存条件-15~-25℃保存,有效期1年。使用说明变性条件下蛋白质去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目标糖蛋白(1-20μg),至终体积10μL;2)100℃温度下煮沸10min使其变性,冰上冷却,离心10秒;3)加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去离子水,总反应体积20μL;4)加入0.2~0.5μL的PNGase,轻轻混匀。在37℃孵育1-3h。非变性条件下蛋白质去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目标糖蛋白(1-20μg)至体积为20μL。2)加入0.5~1μL的PNGaseF,轻轻混匀。3)37°C孵育4-24h。注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGaseF的量和延长孵育时间。Recombinant Cynomolgus CD3E/CD3 epsilon Protein,hFc Tag酵母重组表达N-糖苷酶F(PNGase F)是一种通过酵母重组表达系统生产的酶。
RecombinantBiotinylatedHumanHLA-A*02:01&B2M&MAGE-A4orMAGE-A8(KVLEHVVRV)MonomerProtein,His-AviTag性能参数分子别名(Synonyms)MAGE-A4orMAGE-A8;MAGE-A4;MAGE-A8;表达区间及表达系统(Source)BiotinylatedHumanHLA-A*02:01&B2M&MAGE-A4orMAGE-A8(KVLEHVVRV)MonomerProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-Terminus.ItcontainsGly25-Thr305(HLA-A*02:01),Ile21-Met119(B2M)andKVLEHVVRVpeptide.[Accession|A0A140T913(HLA-A*02:01)&P61769(B2M)&KVLEHVVRV]分子量大小(MolecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof50.50kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto52-62kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.纯度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制剂(Formulation)Suppliedas0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).储存条件Theproductshouldbestoredat-85~-65℃for1yearfromdateofreceipt.
RecombinantBiotinylatedHumanENPP-3Protein,His-AviTag性能参数分子别名(Synonyms)NPP3;E-NPP3;PD-Ibeta表达区间及表达系统(Source)BiotinylatedHumanENPP-3ProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheN-Terminus.ItcontainsLeu48-Ile875.[Accession|O14638]分子量大小(MolecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof99.97kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto110-130kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.纯度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制剂(Formulation)Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重构方法(Reconstitution)Centrifugethetubebeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.储存条件Theproductshouldbestoredat-25~-15℃for1yearfromdateofreceipt.2-7days,2~8°Cundersterileconditionsafterreconstitution.3-6months,-85~-65℃understerileconditionsafterreconstitution.2aR蛋白在细胞内发挥着不同的作用,例如在信号传递、物质转运和细胞通讯等方面。
抑肽酶(Aprotinin),一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛应用于生物技术领域。本研究探讨了利用大肠杆菌(E. coli)表达系统生产重组抑肽酶的方法,及其在科研和工业生产中的优势。引言抑肽酶,又称胰蛋白酶抑制剂,是一种小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶的活性。在生物制药、细胞培养和分子生物学研究中,抑肽酶的使用对于防止非特异性蛋白水解至关重要。传统的抑肽酶主要来源于动物,如牛肺,但存在外源病毒污染的风险。因此,利用大肠杆菌表达系统进行重组抑肽酶的生产,可以提供一种无动物源、高纯度、质量稳定的替代品。材料与方法基因克隆与表达载体构建:人源Ⅲ型胶原蛋白基因被克隆并构建到适合大肠杆菌表达的质粒载体中。大肠杆菌表达菌株的构建:通过转化,将构建好的质粒导入大肠杆菌宿主菌中,构建表达菌株。发酵培养:利用发酵罐进行大肠杆菌的扩大培养,以提升重组抑肽酶的产量。蛋白纯化:通过多次柱纯化获得高纯度的重组抑肽酶。全长跨膜蛋白A2AR,也就是腺苷受体A2aR(ADORA2A),是一种七次跨膜蛋白,属于G蛋白偶联受体。Recombinant Mouse RANKL/sRANK Ligand/TNFSF11Protein
泛素化是一个可逆的过程,存在去泛素化酶可以去除泛素分子,从而调节泛素化的水平和功能。Recombinant Biotinylated Human CD161 Protein,His-Avi Tag
利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato,CPI)活性多肽基因,克隆于表达载体pGEX一4T一1的多克隆位点中,得到重组质粒pGCPI,测序后将重组质粒转化到受体茵EscherichiacoliBL21中。重组茵经IPTG诱导表达,超声波破茵后,通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白,纯度大于97%。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽一S一转移酶后得到纯度大于98%的重组CPI,ELISA鉴定产物具有免疫原性,体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。Recombinant Biotinylated Human CD161 Protein,His-Avi Tag
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