2)优点和缺点血清是非常复杂的混合物,成分多样,含有各种生理平衡的分子量差别很大的生物分子,有的对细胞生长有促进作用,如含有携带、矿物质、微量元素和脂类物质的转运蛋白等。血清能够提供细胞贴壁因子和扩散因子。血清中含有起稳定作用和的因子,能够维持培养基的pH值并抑制蛋白酶直接或间接的酶解。但是血清的加入也带来了很多问题:(1)血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;(2)血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制。 小鼠的单核/巨噬细胞系RAW264.7用含10%FBS的DMEM 高糖培养基于37℃,5% CO2培养,其中含1%青链霉素。BxPC-3(BxPC3) 完全培养基培养基
、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。人工合成培养基使用时还需添加一定量的血清使细胞生长和繁殖:组成蛋白质的基本单位。不同的细胞对氨基酸的需求各异,但几种必需氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,如组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸,细胞可以自己合成,或通过转氨作用由其他物质转化而来。绝大部分细胞对谷氨酰胺有较高的要求,因为谷氨酰胺是作为能源及碳源物质同时被细胞利用,是是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡,所以各种培养液中都含有较多的谷氨酰胺。细胞所能利用的氨基酸是L型同分异构体,D型氨基酸不能被利用。维生素:维持细胞生长的一种生物活性物质,对细胞代谢有重大作用。它们在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。维生素分为水溶和脂溶两大类,的培养液中直接采用ATP和辅酶A。葡萄糖:大部分培养基都以葡萄糖作为能量来源之一。 外周血CD8+T细胞完全培养基(3)是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。
无机盐:维持培养基渗透压平衡,参与细胞的代谢活动。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+等。Na+是细胞外液中主要的阳离子,对维持渗透压的恒定有决定性的作用。K+主要分布在细胞内液,细胞内K+对于某些酶是必需的,并在调节细胞内环境的酸碱平衡上也有极重要意义。Ca2+在细胞外液中的作用是将组织内部细胞之间相互粘着,在细胞内参与许多重要的细胞生理活动,如传导、参与肌肉细胞收缩等。在悬浮培养时,为了减少细胞的聚集和附着,要减少Ca2+的浓度。Mg2+是构成细胞间质的重要成分,对于细胞间相互稳定结合有很重要的意义。磷的化合物对细胞物质代谢和生理功能调控有重要作用。其他成分:肽、核苷、嘌呤等。可帮助细胞的克隆化培养及维持某些特殊细胞系的生长。,营养缺乏容易引起细胞凋亡,新生牛血清中所含大部分营养成分可以通过化学成分明确的营养物质如氨基酸维生素等成分组合取代。低血清培养基营养成分大优于基础培养基,需添加1%~5%新生牛血清,而对细胞生长、增殖、形态、活性和功能没有影响甚至有所改善。
无血清细胞培养基(serumfreemedium,SFM)是指在使用中无需添加血清的细胞培养基,且其组成成分不含有任何动物组分。按照其组分分类,还可以分为无动物组分无血清细胞培养基和化学限定无血清细胞培养基,前者组分中可能含有某些植物来源成分,而后者完全由化学成分明确的组分组成。其中,无动物组分无血清细胞培养基是目前在生物制药行业中应用的,它提高了细胞培养的质量,避免了使用血清带来的麻烦。目前,已有多种无血清培养基上市,如杂交瘤细胞无血清培养基、CHO细胞无血清培养基、Vero细胞无血清培养基和NS0细胞无血清培养基等。无血清培养基通常添加生长附加成分,如与生长因子、低分子营养成分和转铁蛋白等促细胞生长的附加成分,一般包括胰岛素、孕酮、硒酸钠、腐胺、转铁蛋白等。 当细胞融合度达到60-80%时,用0.25%Trypsin-EDTA进行消化进行传代。
皮细胞是位于皮肤或腔道表层的细胞,形状有扁平,柱状等。构成皮肤的上皮细胞使皮下组织免受损伤,细菌侵入,危险化学物质的损害,并且避免机体过度失去水分。覆盖胰腺的上皮细胞会分泌酶促进消化;小肠上皮细胞会从消化的食物中吸收养分;呼吸道上皮细胞构成黏膜,这些黏膜能分泌黏液阻止吸入的细菌与病毒进入肺部。上皮细胞完全培养基包含上皮细胞所需的各种养分,无需添加任何成分,可直接用于人或其他动物上皮细胞的体外培养。经过长期测试,可维持上皮细胞比较好的生长状态。【适用范围】适用于培养各种上皮细胞,如乳腺上皮细胞(MCF-10A),人角膜上皮细胞(HCEpiC),人子宫内膜上皮细胞(hEEC),人输尿管上皮细胞(SV-HUC-1),大鼠肾小管上皮细胞(NRK)等。【使用方法】完全培养基从冰冻区中取出后(切勿直接将产品从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),置于2℃~8℃中使之融化,解冻过程中间歇地轻轻摇晃均匀,待全部溶解后再分装或直接使用。融解后的完全培养基,建议其置于4℃冰箱存放并于1-2周内用完。 加适量1%明胶到培养器皿中,能覆盖整个培养器皿底面的量即可。 摇匀液体使其覆盖整个培养器皿的底面。HBE135-E6E7完全培养基培养基
本产品适用于C57BL/6小鼠脂肪间质干细胞、C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞、Balb/c小鼠脂肪间质干细胞等。BxPC-3(BxPC3) 完全培养基培养基
经典的商品化培养基有很多种,其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是应用的培养基。其他如:M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。以下介绍10种常用的商品化细胞培养基以及常用的细胞完全培养基配置方法。1、BME细胞培养基基础Eagle培养基(BasalMediumEagle),1955年Eagle设计,BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM细胞培养基又称低限量Eagle培养基(MinimalEssentialMedium),1959年在Eagle's基础培养基(BME)上修改而来,删去赖氨酸、生物素,氨基酸浓度增加,适合多种细胞单层生长,有可高压灭菌品种,是一种基本、试用范围广的培养基,但因其营养成分所限,针对生产之特定细胞培养与表达时,并不一定是使用效果佳或者经济的培养基。 BxPC-3(BxPC3) 完全培养基培养基
无锡菩禾生物医药技术有限公司汇集了大量的优秀人才,集企业奇思,创经济奇迹,一群有梦想有朝气的团队不断在前进的道路上开创新天地,绘画新蓝图,在江苏省等地区的商务服务中始终保持良好的信誉,信奉着“争取每一个客户不容易,失去每一个用户很简单”的理念,市场是企业的方向,质量是企业的生命,在公司有效方针的领导下,全体上下,团结一致,共同进退,**协力把各方面工作做得更好,努力开创工作的新局面,公司的新高度,未来无锡菩禾生物医药技术供应和您一起奔向更美好的未来,即使现在有一点小小的成绩,也不足以骄傲,过去的种种都已成为昨日我们只有总结经验,才能继续上路,让我们一起点燃新的希望,放飞新的梦想!
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