培养平板培养基是被用于获得微生物纯培养的很常用的固体培养基形式,它是冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面,常被简称为培养平板。也叫平面培养基、平皿培养基。平板培养基常用于单孢分离,测定菌丝生长速度,观察菌落的形态,拮抗实验,测定接种空间杂菌数。平板培养基制作方法如下:将培养皿洗净、干燥,使各培养皿盖方向一致,用牛皮纸包好,或放入特制铁罐内,注明皿盖的方向。高压灭菌或干燥灭菌后备用。取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内,先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞),同时将三角瓶转换至右手,而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝,陕西实验室培养基制备器,至瓶口刚好伸人。三角瓶口经火焰烧灼后,倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上,以免沾染皿壁),陕西实验室培养基制备器,迅速盖好皿盖,置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基,陕西实验室培养基制备器。有时凝固后的培养基表面有冷凝水,可将平皿盖打开倒置于37℃温箱,除去冷凝水,否则将影响平板分离培养效果。为防止冷凝水过多,也可将培养基冷却至45~50°C再倒平板。培养基制备器可直接连接标准、通用的蠕动泵和稀释、充填培养皿系统。陕西实验室培养基制备器
微生物检验培养基制备的要点:培养基溶化,将中海培养基纳入烧杯容器中,加小适量的水,缓慢加水并用玻璃棒小幅度搅拌。倘若培养基中不含琼脂,则不需要对培养基加热;相反含有琼脂,就需要用本生灯/电磁炉加热煮沸。待培养基完全溶解后再加入适量的水搅拌均匀。如准备的北京中海培养基较多,在不锈钢锅中融化加热,可以用温水加热,需不停搅拌,防止焦化。如果不小心出现焦化现象,则制备好的培养基将无法使用,必须重新配制中海生物培养基。不要使用铜或铁容器溶解制备培养基,因为铜或铁容器可能会导致容器内培养基中铜、铁超标,影响实验结果,其中培养基中铜含量大于0.3毫克每升,细菌不适宜生长。铁含量超过0.14毫克每升,防止细菌产生有毒的。容易发生反应和沉淀的药物应单独溶解,然后加入培养基中,如磷酸氢二钾和硫酸镁。陕西实验室培养基制备器培养基制备器杀菌剂可从此口加入,也可用注射器从硅酮膜注入。
培养基的灭菌:一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中,如无特殊规定,即可用此法灭菌。某些畏热成分,如糖类,应另行配成20%或更高的浓液,以过滤或间歇灭菌法消毒,以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和物品等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出,冷至55℃-60℃时,摆置成适当斜面,待其自然凝固。
微生物检验培养基制备的要点:称取数量,用1/100的电子天平称出培养基所需的药物。首先参照配方计算出配制相应培养基需要各成分的数量,然后用电子天平准确称取重量(将称量纸折叠成簸箕盛药)。培养基过滤,如果对配制的培养基没有特殊要求,这一步可以省略。中'海培养基如有浑浊和沉淀现象,可将需要澄清的液体培养基用油纸过滤。固体介质可以用双层纱布过滤,中间有一层薄薄的脱脂棉。如果过滤法不能满足澄清要求,可以采用蛋清澄清法,即将培养基加热冷却至五十度至六十度,不超过三角瓶一半的容量。每一千毫升放入1~2个蛋清,用力摇晃三至五分钟,用121℃高压蒸汽灭菌二十分钟,趁热取出过滤。培养基的实验室制备:正确制备培养基时微生物检验的较基础步骤之一。
培养基的安全分装:无菌补料:通过分装口可以定量添加无菌添加剂。大尺寸的分装口带有安全锁。通过使用一个瓶子将添加剂添加到分装开口或通过一个septum膜,使用注射器将添加剂加入,确保了添加剂的无菌添加。无菌分装:培养基制备器的分装口可以在分装的时候打开,用于无菌分装培养基。硅胶管是使用分装接头连接到分装口。为了确保培养基的无菌分装,硅胶管和分装接头必须提前在灭菌器中灭菌。培养基可以通过集成的空压机产生的无菌空气压力分装或通过连接到常见的蠕动泵或其他集成成泵的装置,来进行培养基的分装。分装选项:制备和灭菌过的培养基可以通过一个软管进行分装。在每次灭菌进程中,内吸管和分装口也通过进入的蒸汽进行了灭菌。分装软管和连接到该软管的分装接头必须使用合适的蒸汽灭菌工艺预先灭菌,并且必须在无菌条件下连接到分装口。培养基制备器保证了配制和灭菌的培养基具有更高的质量,整个过程,在一个设定温度内。广东培养基制备器供应商
在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分。陕西实验室培养基制备器
培养基制备操作步骤:(一)准确称量试剂根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。(二)校正pH值将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。(三)过滤将玻璃漏斗置铁架上,再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。(四)分装将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。(五)灭菌培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。陕西实验室培养基制备器
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