【操作步骤】

　　1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

　　2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

　　3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

　　4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

　　5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

　　6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

　　7、温育：重复4的操作。

　　8、洗板：重复5的操作。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。

　　10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

　　11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

　　12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。**终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

　　【样本要求】

　　1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

　　2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

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